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自1956年Sorrention首次提出人工肝以来,人们一直希望采用体外肝脏支持的方法来代替患者衰竭的肝脏功能,为其等待肝移植或者自身肝再生创造条件。生物人工肝支持系统的应用被证明是有效的,但目前的人工肝系统还只能取代肝脏的部分功能,其仍有待于进一步完善。
本文旨在构建肝细胞特异性的三维仿生支架,用于肝实质细胞与肝非实质共培养,从而模拟体内肝细胞的生长环境,优化体外肝细胞培养系统,提高肝细胞代谢功能,优化生物人工肝支持系统。
实验中以壳聚糖,海藻酸,透明质酸为基质材料,并对透明质酸进行半乳糖改性,制备壳聚糖/半乳糖化透明质酸三维海绵体支架和海藻酸/透明质酸微胶囊。通过红外,元素分析,及X射线光电子能谱表征半乳糖基团对透明质酸的修饰,扫描电镜观察支架形态,液体替代法测定孔隙率。通过细胞在材料表面的黏附,支架中的细胞形态及特异性肝功能的表达表征材料对于细胞的相容性。实验结果表明支架中半乳糖化透明质酸的添加改善了支架的肝脏细胞亲和性,有利于体外培养肝细胞类肝组织结构的形成和分化功能的表达。此外,海藻酸/透明质酸微胶囊体系中,考察了微囊的制备条件及细胞在微囊中的生长情况。微囊化细胞实验结果表明凝胶基质中透明质酸的添加明显改善了微囊中共同培养肝细胞的聚集和肝功能的表达。
本实验中成功构建了壳聚糖/半乳糖化透明质酸海绵体支架和海藻酸/透明质酸微胶囊两种肝细胞培养体系,实验结果表明两种体系均适于肝细胞的体外培养,从而为生物人工肝反应器的优化奠定基础。