TfR1/SNPA424G的蛋白表达及与低氧训练效果的关联

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目的:  本研究通过定点突变与构建原核表达系统,观察 TfR1/SNPA424G对转铁蛋白受体二级结构的影响,为探讨该SNP位点作为有氧运动能力分子标记的分子调控机理,同时探讨TfR1/SNPA424G作为预测低氧训练效果分子标记的可行性。  方法:  以突变前后的TfR1基因片段作为研究对象,将人工碱基合成的TfR1基因部分片段,插入表达载体pET-28α,构建重组表达质粒TfR1-PET-28α,转化大肠埃希菌BL21(DE3),获得含重组表达质粒的转化子,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察TfR1-His融合蛋白表达情况。利用Ni-NTA His Bind亲和层析柱纯化His-TfR1融合蛋白,制备纯化的重组TfR1蛋白。通过圆二色谱检测并分析突变前后融合蛋白二级结构的差异。以72名北京体育大学男学生为实验对象,进行4周HiHiLo,于低氧训练前1天,低氧训练第4、7、16、23、30天取静脉血,分析血象指标、递增负荷中血氧饱和度(Pulse oximetry,SpO2)、肌氧含量(Muscle oxygen content,MOC)等生理指标的变化,观察 SNP/A424G与HiHiLo效果的关联性。  结果:  圆二色谱分析显示,突变后融合蛋白的最低峰所在波长由200 nm变为220 nm,且峰度降低。突变前的融合蛋白组成为α螺旋12.9%,β折叠46.0%,转角13.5%,无规卷曲27.6%,其中α螺旋结构约占1/8;而突变后融合蛋白中二级结构的组成为α螺旋70.9%,β折叠18.5%,转角10.6%,其中α螺旋结构约占7/10且没有无规则卷曲。SNP/A424G与4周HiHiLo生理指标变化无相关性。  结论:  SNP/A424GA使发生碱基替代处局部的蛋白质二级结构发生变化,可能最终影响TfR1转铁的功能。SNP/A424G可能不可作为预测低氧训练效果的分子遗传学标记。
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