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目的:帕金森病(PD)发病率随年龄增大而增加。与此同时,PD患者可能并发心肌缺血的风险也逐渐增高。多巴胺受体激动剂是常用的治疗PD药物,按其结构分为麦角类和非麦角类。麦角类多巴胺受体激动剂具有潜在的导致心肌缺血损伤风险,而非麦角类多巴胺受体激动剂在治疗PD过程中如患者并发心肌缺血,其心肌损伤程度加重、减轻亦或无改变目前尚不明确。本课题将研究应用非麦角类多巴胺受体激动剂罗匹尼罗、罗替戈汀短效或长效制剂过程中如果发生心肌缺血对心肌损伤程度的影响。方法:⑴昆明种小鼠随机分为7组:对照组(Control)、异丙肾上腺素组(ISO)、应用罗匹尼罗1h后发生心肌缺血(ROP1)组、应用罗匹尼罗2h后发生心肌缺血(ROP2)组、应用罗匹尼罗4h后发生心肌缺血(ROP4)组、应用罗匹尼罗8h后发生心肌缺血(ROP8)组、应用罗匹尼罗12h后发生心肌缺血(ROP12)组,每组10只。实验开始第一天小鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)(10mg/kg,1次/天),连续3d,制备心肌缺血模型,Control组皮下注射同体积生理盐水。罗匹尼罗组小鼠在注射ISO1h、2h、4h、8h、12h前灌胃给予罗匹尼罗(5mg/kg),连续3d,Control组和ISO组灌胃给予同体积0.5%羧甲基纤维素钠。第三天末次注射ISO1h后麻醉小鼠,眼内眦静脉取血,室温静置40min后离心,3500r/min,30min,分离血清检测cTNI、CK-MB及罗匹尼罗血药浓度。每组随机取3只小鼠心脏,4%甲醛固定,HE染色观察心肌病理损伤。⑵昆明种小鼠随机分为5组:Control组、ISO组、ROP2组、氟哌啶醇(HAL)组、氟哌啶醇+罗匹尼罗(HAL+ROP2)组。小鼠皮下注射ISO,连续3d,制备心肌缺血模型。ROP2组小鼠在注射ISO2h前灌胃给予罗匹尼罗(5mg/kg),HAL组在注射ISO2.5h前皮下注射氟哌啶醇(0.3mg/kg),HAL+ROP2组于注射ISO2.5h前皮下注射氟哌啶醇(0.3mg/kg),30min后灌胃给予罗匹尼罗(5mg/kg),1次/天,连续3d。取血,分离血清检测cTNI、CK-MB。取小鼠心脏,HE染色观察心肌病理损伤。⑶昆明种小鼠随机分为7组:Control组、ISO组、应用罗替戈汀30min后发生心肌缺血(RT0.5)组、应用罗替戈汀2h后发生心肌缺血(RT2)组、应用罗替戈汀6h后发生心肌缺血(RT6)组、应用罗替戈汀12h后发生心肌缺血(RT12)组、应用罗替戈汀20h后发生心肌缺血(RT20)组。小鼠皮下注射ISO,连续3d,制备心肌缺血模型。罗替戈汀各组小鼠于注射ISO30min、2h、6h、12h、20h前皮下注射罗替戈汀(1.4mg/kg)。取血,分离血清检测cTNI、CK-MB及罗替戈汀血药浓度。取小鼠心脏,HE染色观察心肌病理损伤。⑷昆明种小鼠随机分为5组:Control组、ISO组、RT2组、氯丙嗪(CRZ)组、氯丙嗪+罗替戈汀(CRZ+RT2)组。小鼠皮下注射ISO,连续3d,制备心肌缺血模型。RT2组小鼠于注射ISO2h前皮下注射罗替戈汀(1.4mg/kg)。CRZ组于注射ISO2.5h前皮下注射氯丙嗪(2mg/kg),CRZ+RT2组在注射ISO2.5h前皮下注射氯丙嗪(2mg/kg),30min后皮下注射罗替戈汀(1.4mg/kg),1次/天,连续3d。取血,分离血清检测cTNI、CK-MB。取小鼠心脏,HE染色观察心肌病理损伤。⑸昆明种小鼠随机分为4组:Control组、ISO组、罗替戈汀缓释微球(RoMS10mg/kg)组和罗替戈汀缓释微球(RoMS40mg/kg)组。罗替戈汀缓释微球组于实验第一天肌肉注射罗替戈汀缓释微球(0.1mL/10g),其余时间不给药。Control组和ISO组小鼠肌肉注射给予同体积的0.5%羧甲基纤维素钠。给药后第五或第十二天,皮下注射ISO,连续3d,制备心肌缺血模型。取血,分离血清检测cTNI、CK-MB及罗替戈汀血药浓度。取小鼠心脏,HE染色观察心肌病理损伤。⑹昆明种小鼠随机分为5组:Control组、ISO组、罗替戈汀缓释微球(RoMS)组、CRZ组、氯丙嗪+罗替戈汀缓释微球(CRZ+RoMS)组。小鼠皮下注射氯丙嗪(2mg/kg,1次/d,连续7d或14d),30min后肌肉注射罗替戈汀缓释微球(第一天注射,共1次),此后第5天或12天起,小鼠皮下注射ISO(10mg/kg,1次/d),连续3d。取血,分离血清检测cTNI、CK-MB。取小鼠心脏,HE染色观察心肌病理损伤。结果:⑴应用罗匹尼罗1h后药物浓度为12.4±6.1ng/mL,2h后达药物浓度峰值,至8h后,血中检测不到罗匹尼罗。与Control组相比,ISO组小鼠cTNI、CK-MB显著增高(P<0.01)。与ISO组比较,应用罗匹尼罗1h、2h、4h后发生心肌缺血,血清cTNI、CK-MB降低(P<0.01)。随着应用罗匹尼罗时间延长,发生心肌缺血后,其降低cTNI、CK-MB作用逐渐减弱。与ISO组比较,应用罗匹尼罗8h、12h后发生心肌缺血,血清cTNI、CK-MB无显著性差异(P>0.05)。Control组小鼠心肌细胞纹理清晰,细胞形态和结构正常,无炎症细胞浸润;而ISO组小鼠心肌细胞结构紊乱,细胞界限消失,有局灶性坏死及空泡变性,细胞间隙明显水肿,大量炎性细胞浸润。罗匹尼罗能够减轻缺血所致的心肌病理损伤,多数心肌细胞结构正常,炎症细胞浸润减少,水肿程度减轻。但随着应用罗匹尼罗时间的延长,发生心肌缺血后,其减轻缺血所致心肌病理损伤的作用降低。而在应用罗匹尼罗8h或12h后发生心肌缺血,其心肌病理损伤程度未见减轻。⑵与ISO组相比,HAL+ROP2组cTNI、CK-MB无明显改变(P>0.05)。与ROP2组比较,HAL+ROP2组cTNI、CK-MB显著升高(P<0.01)。应用罗匹尼罗2h后发生心肌缺血其心肌病理损伤明显减轻。但同时应用氟哌啶醇及罗匹尼罗后发生心肌缺血其病理损伤未见明显减轻。⑶应用罗替戈汀0.5h后,血清中罗替戈汀的浓度为26.1±9.5ng/mL。2h后血药浓度达峰值,浓度为43.7±18.7ng/mL。而后罗替戈汀浓度开始下降,12h候血药浓度为7.4±2.5ng/mL,20h后罗替戈汀完全被清除。与Control组比较,ISO组小鼠cTNI、CK-MB显著增高(P<0.01)。与ISO组相比,应用罗替戈汀0.5h、2h、6h、12h后发生心肌缺血,cTNI、CK-MB显著降低(P<0.01)。与ISO组相比,应用罗替戈汀20h后发生心肌缺血,cTNI、CK-MB无改变。Control组小鼠心肌细胞纹理清晰,细胞形态和结构正常,ISO组小鼠心肌细胞结构紊乱,有明显空泡变性,细胞间隙水肿,炎性细胞浸润。应用罗替戈汀0.5,2,6,12h后发生心肌缺血能够明显减轻心肌病理损伤。但应用罗替戈汀20h后发生心肌缺血其病理损伤未见明显减轻。⑷与ISO组相比,CRZ+RT2组cTNI、CK-MB无明显改变(P>0.05)。与RT2组比较,CRZ+RT2组cTNI、CK-MB显著升高(P<0.01)。应用罗替戈汀2h后发生心肌缺血其病理损伤减轻。但同时应用氯丙嗪及罗替戈汀后发生心肌缺血其病理损伤未见明显减轻。⑸单次肌肉注射罗替戈汀缓释微球后,第7d,血罗替戈汀浓度分别为7.7±2.1ng/mL,21.6±4.15ng/mL;第14d,血罗替戈汀浓度为1.4±0.4ng/mL,3.4±1.1ng/mL。与Control组相比,ISO组cTNI水平和CK-MB活性升高(P<0.01),单次给予罗替戈汀微球10mg/kg或40mg/kg7d或14d后发生心肌缺血,cTNI水平和CK-MB活性降低(P<0.01)。Control组小鼠心肌细胞纹理清晰,细胞形态和结构正常,ISO组小鼠心肌细胞结构紊乱,大量炎症细胞浸润,细胞界限消失,局灶性坏死。应用罗替戈汀微球7d或14d后发生心肌缺血,心肌细胞病理损伤减轻,炎症细胞浸润减少,水肿程度降低。⑹单次给予罗替戈汀缓释微球7d或14d后发生心肌缺血,与ISO组比较,CRZ+RoMS组cTNI、CK-MB显著降低(P<0.01或P<0.05)。与RoMS组比较,CRZ+RoMS组cTNI、CK-MB升高(P<0.01)。与ISO组相比,同时应用氯丙嗪和罗替戈汀缓释微球7d或14d后发生心肌缺血,小鼠心肌病理损伤程度减轻。与RoMS组比较,氯丙嗪和罗替戈汀缓释微球7d或14d后发生心肌缺血其病理损伤程度加重。结论:应用罗匹尼罗、罗替戈汀短效或长效制剂过程中如果发生心肌缺血,罗匹尼罗、罗替戈汀的短效或长效制剂皆可减轻心肌细胞损伤;罗替戈汀长效制剂减轻心肌细胞损伤作用明显优于短效制剂,其作用时间更为持久和平稳;罗匹尼罗、罗替戈汀在治疗具有心血管高危状态的帕金森病病人过程中,不增加心肌缺血致损伤程度,对心肌缺血损伤有潜在保护作用。创新点:明确了非麦角类多巴胺受体激动剂-罗匹尼罗、罗替戈汀在用于治疗帕金森病的过程中,如果患者发生心肌缺血,该类药物对心肌损伤有减轻作用;应用持久和平稳激动多巴胺受体的长效制剂,如果患者发生心肌缺血,其减轻心肌细胞损伤作用优于短效制剂。