应用RNA干扰下调MARCH6抑制乳腺癌细胞恶性增殖的体外研究

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目的:  应用慢病毒介导的RNA干扰技术,在乳腺癌MCF-7细胞中沉默MARCH6基因表达,研究其对MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响。  方法:  1、靶向MARCH6基因的shRNA慢病毒转染293T细胞后,荧光显微镜下观察荧光量验证转染效率,将转染293T细胞后的慢病毒液感染MCF-7细胞,沉默MARCH6基因表达,荧光显微镜下观察荧光量,初步判断沉默效果;  2、Real-time PCR和Western blot验证被MARCH6 shRNA慢病毒感染后的MCF-7细胞中MARCH6在转录水平和蛋白水平的表达;  3、MTT、BrdU细胞增殖实验检测MARCH6 shRNA慢病毒感染后MCF-7细胞后,该细胞的增殖状况;PI染色流式细胞术检测细胞周期分布,阐明MARCH6下调后对MCF-7细胞增殖能力和细胞周期的影响。  结果:  1、通过在荧光显微镜下观察,MARCH6 shRNA慢病毒质粒成功转染293T细胞,与同明视野对比,可见70%左右的细胞带绿色荧光;通过荧光显微镜观察,初步判断慢病毒液成功感染MCF-7细胞,与同明视野对比,90%的细胞均带绿色荧光;  2、Western Blot和Real-Time PCR验证了MARCH6 shRNA慢病毒感染MCF-7细胞后,MARCH6在转录水平和蛋白水平表达显著下降;  3、MTT实验、BrdU法结果显示MARCH6基因沉默组的MCF-7细胞增殖显著下降(p<0.01),流式细胞术分析表明,MARCH6沉默后导致MCF-7细胞出现细胞周期抑制,细胞分裂处于G1期细胞数明显增多,增殖指数显著降低。  结论:  应用RNAi技术沉默乳腺癌MCF-7细胞的MARCH6基因后,可以抑制MCF-7细胞的增殖,并引起周期阻滞。提示MARCH6的表达能促进乳腺癌细胞的增殖。
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