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本试验以miRNA为研究对象,检测其在山羊卵巢排卵周期中的差异表达变化,以期寻找到影响山羊卵巢激素周期性变化的miRNA及其靶基因。本试验采用高通量测序的方法,探索miRNA在山羊卵巢排卵周期中转录后水平的调控机制,通过预测其候选靶基因,对靶基因进行GO富集和KEGG通路分析,找出与山羊生殖疾病和排卵周期的调节相关的miRNA。研究结果可以用于探索miRNA在山羊卵巢排卵周期中所起到的调节作用,而且试验结果中测序得到的miRNA有助于后续生殖疾病的治疗和调节排卵周期的相关研究。(1)通过二代测序技术对卵泡期和黄体期山羊卵巢进行分析。本次测序在卵泡期(FO)和黄体期(LO)两个文库中分别得到11727490条和12209928条原始序列。经质量控制程序处理后卵泡期文库得到11546193条纯净序列,黄体期文库得到12013471条纯净序列。(2)为得到miRNA差异表达谱及相关基因组中的具体信息,对FO和LO的miRNA靶基因进行生物信息学分析。与NCBI上山羊参考基因组同源比对,鉴定出卵泡期和黄体期分别得到342种和352种已知miRNA,分别得到8482909和7136846的序列表达量。对未注释上任何RNA但是对比上基因组外显子反义链、内含子、基因间区的sRNAs预测新miRNA,结果得到miRNA卵泡期70种和黄体期94种,表达量分别为182432和157756。其中有25种在卵泡期和黄体期共同表达。(3)FO和LO的miRNA差异表达及GO和KEGG分析。FO与LO中已知miRNA有125种miRNA显著差异表达,其中相对于黄体期40种上调,85种下调;新miRNA中有51种差异显著,其中相对于黄体期14种上调,37种下调,且有22种在黄体期中特异性表达且差异极显著。对miRNA进行GO富集和KEGG通路分析,结果表明已知miRNA中,没有通路是显著富集的,但VEGF signaling pathway,Neuroactive ligand-receptor interaction,GnRH signaling pathway等通路可能与卵泡的发育和黄体的形成有关;新miRNA中,FO与LO间的差异基因共富集了310个信号通路,在氨基酸代谢、GnRH信号通路、脂肪消化吸收通路中显著富集。(4)随机选取5个miRNA转录本进行定量PCR验证。结果表明,定量PCR结果与测序结果相符,说明测序数据的可靠性。总之,本研究通过使用测序技术对排卵周期中山羊卵巢组织进行测序,得到了山羊卵巢中miRNA的表达谱,不仅发现新的miRNA,而且经过对比发现,得到了可能与山羊卵泡发育成黄体相关的miRNA,最终筛选出125种已知miRNA和51种新miRNA差异表达,let-7f、miR-21、miR-145以及miR-125a等miRNA和VEGF signaling pathway,Neuroactive ligand-receptor interaction,GnRH signaling pathway等通路可能参与排卵周期的调节。