牛支原体NM2012株生物学特性研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:asdfghjka
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牛支原体病近十年来在我国流行严重,特别是传染性牛支原体肺炎在一些地区的肉牛和奶牛群中发病率和病死率均很高,造成巨大的经济损失,严重阻碍养牛业的健康发展。内蒙古农业大学于2012年从内蒙地区分离到一株牛支原体(NM2012),前期已对其进行了鉴定和基因全序列测定。为进一步全面了解和掌握NM2012株的生物学特性,本研究对不同培养代次的NM2012株进行了培养特性、免疫原性和致病性研究,研究成果将为今后进一步进行牛支原体病基础研究和疫苗研究奠定基础。将牛支原体NM2102株分别接种于6种专用液体培养基中,37℃培养5天后采用菌落形成单位检测法进行活菌计数,结果表明,本研究试验的“1号液体培养基”最适合牛支原体NM2012株生长;将牛支原体NM2102株的6代、12代和20代菌株分别接种到100ml液体培养基中,37℃培养3天,每天观察培养基变化情况,并于3天后分别采用菌落形成单位检测法进行活菌计数,结果表明,三个代次的菌株在液体培养基的增殖情况基本一致,增殖速度接近,培养3天后,浓度均达到109/mL级;将牛支原体NM2102株第6代、12代和20代菌株分别划线接种固体培养基平皿,37℃培养5天,于显微镜下观察菌落形态,结果表明,三个代次菌株的菌落形态基本一致。将牛支原体NM2012株第6代、第12代、第20代菌株分别经人工气管注射感染2周龄至2月龄阿伯丁.安格斯犊牛,攻毒后连续观察27天,记录攻毒后临床症状,采用PCR方法检测鼻腔排菌情况,采用ELISA方法检测血清牛支原体抗体,在感染后第14天和第27天分两次处死试验牛,观察肉眼病理变化和组织学病理变化,结果表明,三个代次的NM2012菌株均对犊牛具有致病性,可引起比较典型的牛支原体肺炎症状和病理变化,所有攻毒试验牛的鼻腔分泌物均有排菌,且大部分试验牛为间歇性排菌,大多数攻毒试验牛均在攻毒后14天以后检测到抗体。将牛支原体NM2012株第6代、第12代、第20代菌株分别经鼻腔接种小鼠,于接种后不同天数随机采取血清进行细胞因子测定,同时采集肺脏、脾脏和胸腺进行脏器指数测定,结果显示,三个试验组部分小鼠的IL-1β和IL-6明显高于空白对照组,但TNF-α与空白对照组无显著差异,三个试验组小鼠的肺指数、脾指数和胸腺指数普遍高于空白对照组,上述结果和牛致病性试验中的抗体检测结果综合表明,NM2012株第6代、第12代、第20代菌株具有的免疫原性。
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