【摘 要】
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肺炎支原体(Mycoplasma Pneumoniae,MP)是引起人类呼吸道感染的常见原因之一,也是支原体肺炎的主要病原学因子.而P1粘附基因是MP的主要致病基因.由P1粘附基因编码的P1粘附蛋
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肺炎支原体(Mycoplasma Pneumoniae,MP)是引起人类呼吸道感染的常见原因之一,也是支原体肺炎的主要病原学因子.而P1粘附基因是MP的主要致病基因.由P1粘附基因编码的P1粘附蛋白,可以介导MP与人类呼吸道纤毛上皮之间的粘附,是MP能够在呼吸道表面定植、进而引起疾病的关键一步.该研究通过PCR扩增获得P1结构基因并加以回收,用EcoRI酶切,然后将其与表达载体PUC19连接,再转入E.coliDH5α受体菌.通过蓝-白选择,挑选白色菌落提取质粒,通过分子量大小比较筛选重组质粒,经PCR扩增和限制性酶切图谱鉴定重组粒.该研究通过PCR扩增的方法获取P1结构基因,将P1扩增片段回收并用EcoRI酶切处理后,再与PUC19质粒载体连接,然后转入E.coli DH5α感受态细胞,用α互补原理筛选转化子.提取质粒,以PUC19和PBR322质粒作对照,筛选重组质粒.最后用PCR扩增和限制性酶切图谱鉴定重组质粒.结论:通过实验作者们获得含有P1结构基因的克隆株,为以后进一步深入研究P1粘附基因的结构和功能,并研究其表达,开发疫苗和诊断试剂,奠定基础.
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