罗耳阿太菌(Athelia rolfsii)胞外多糖提取纯化、理化性质及功能活性研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:cxxcxj
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罗耳阿太菌胞外多糖(Athelia rolfsii exopolysaccharides,AEPS)属于小核菌多糖,是罗耳阿太菌(Athelia rolfsii)分泌的一种大分子胞外β-葡聚糖。该多糖具有多种优良的特性,如,增稠性、稳定性、持水性及抗肿瘤活性,受到食品、化妆品及医药等多种研究领域的青睐。但该多糖生产成本较高,且国内对该多糖的需求主要依赖进口,增加了其应用成本。本课题组以降低该多糖生产成本为目的,在君子兰上筛得一株罗耳阿太菌,以玉米淀粉和黄浆等低成本碳氮源为培养基成分,发酵生产罗耳阿太菌胞外多糖,最终获得多糖产量为16.135g/L。这为打破该多糖高成本生产且依赖进口的局面奠定良好理论基础。但该多糖的后续研究工作却未开展,不利于多糖的推广和应用。因此,本文研究低成本罗耳阿太菌胞外多糖的提取、分离纯化工艺,分析多糖的吸湿保湿特性及黏度稳定性,并进一步研究该多糖的抗氧化活性、体外抗菌活性和重金属离子清除活性,为该多糖在生产与应用中提供一定的理论依据。主要研究结果如下:1.应用Box-Behnken试验设计优化AEPS醇沉提取工艺。最终得到AEPS醇沉最佳条件为:浓缩倍数3、醇沉时间17 h、醇沉温度5℃、无水乙醇体积为发酵液的1.7倍。该条件下所得AEPS提取量为12.24 g/L。2.采用Sephacryl S400-HR对脱色和透析后的AEPS进行凝胶柱层析,层析的最佳条件为:双蒸水作为流动相,流速为0.5mL/min,上样量为4mg(浓度为1mg/mL)。层析后得到两个组分AEPS1和AEPS2,AEPS1和AEPS2紫外光谱分析显示两种组分均不含核酸和蛋白成分,红外光谱分析初步获得多糖的基团结构。进一步采用高效渗透凝胶色谱测得,AEPS1的数均分子量Mn为8.06×106,重均分子量Mw为1.39×107。3.在饱和(NH4)2SO4溶液环境中(相对湿度81%)和干燥硅胶环境下,分别对比AEPS、壳聚糖和尿素的吸湿和保湿性能。结果表明,AEPS吸湿及保湿性能明显优于壳聚糖和尿素。研究温度、pH值及不同离子浓度对多糖绝对黏度的影响,确定多糖黏度稳定性。结果表明,在pH 1~12、离子浓度0~1.0 mol/L范围内,AEPS黏度几乎不受影响,而温度对多糖黏度影响较大,在5~95℃范围内,35℃时AEPS黏度最低,为51mPa·s,随着温度升高或降低,多糖黏度均升高。4.AEPS具有抗氧化活性。通过测定AEPS的Fe2+的螯合能力和还原力,以及对DPPH、羟基自由基的清除能力4个抗氧化指标评估AEPS抗氧化活性。结果表明,AEPS浓度为4mg/mL时,对DPPH清除率为47.98%,还原力达到0.303;浓度为1.5mg/mL时,对羟基自由基(·OH)清除率为17.6%,且之后随AEPS浓度的增大趋于稳定;2.5mg/mL时,对Fe2+的螯合率为74.4%。5.以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为指示菌,采用琼脂孔扩散法探究AEPS体外抗菌活性,结果表明,AEPS对4种指示菌均无体外抗菌活性。6.以水溶液中Cd2+、Cu2+、Zn2+为指示重金属离子,研究pH、反应时间、AEPS初始浓度和重金属离子初始浓度对重金属离子吸附量(qe)的影响,并探究其物理吸附模型。结果表明,25℃条件下,pH 5~7范围内,反应时间为60 min时,AEPS对Cd2+、Cu2+、Zn2+清除作用均达到最佳。与弗兰德里奇吸附等温模型相比,AEPS对Cd2+、Cu2+、Zn2+的吸附数据更符合朗缪尔等温吸附模型。根据朗缪尔吸附等温模型得出AEPS对Cd2+、Cu2+、Zn2+的最大吸附量理论值分别为116.28,103.09和153.85mg/g。AEPS对三种重金属离子的吸附能力大小为:Zn2+>Cd2+>Cu2+。
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