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目的:建立大鼠骨髓来源的树突状细胞体外培养体系,检测腺病毒对于树突状细胞的感染效率,建立AIRE-DC疫苗并鉴定其性状与生物学功能。方法:(1)取4~6周龄SD大鼠,提取大鼠骨髓细胞,经过红细胞裂解液去除红细胞,贴壁细胞经细胞因子诱导,获得较高纯度的成熟大鼠骨髓源性树突状细胞(r BM-DCs),期间每日观察树突状细胞(DC)形态变化;(2)构建重组AIRE基因的腺病毒载体(Ad),通过腺病毒感染DC进行特定基因修饰,通过流式细胞术以及免疫印迹法验证Ad对于悬浮生长的r BM-DCs以及贴壁生长的DC2.4细胞株的感染以及基因修饰效率,找出最合适的腺病毒感染复数;(3)提取鼠全细胞肝癌细胞株RH-35抗原,将AIRE基因修饰的DC负载肿瘤抗原,检测表面分子CD83、CD86、CD11c的m RNA表达水平,并通过流式细胞术检测CD80、和MHC-II的表达,研究AIRE基因对于树突状细胞性状以及生物学功能影响。结果:(1)骨髓细胞悬液经各类处理以及细胞因子诱导后可获得较高纯度的DC,且随着培养时间的增长,DC细胞逐渐增大,表现出明显的树枝样或者细足样分叉和突起,并从半贴壁生长逐渐转变为贴壁生长;(2)腺病毒对于DC2.4细胞株以及r BM-DCs均具有较高的感染效率,且均能成功对DC进行修饰,其中DC2.4的最适感染复数为50MOI,感染效率可达90%以上;r BM-DCs的最适感染复数为100MOI,感染效率为70%左右,更高的感染复数则会产生较大细胞毒性;(3)经AIRE基因修饰过的r BM-DCs经过肿瘤抗原负载的条件下表现出各类细胞表面分子的显著表达上升,CD80、CD83、CD11c与未处理组相比具有显著性差异(p<0.05),CD86和MHC-II类分子与未处理组相比差异非常显著(p<0.01),同时转染空载体的r BM-DCs表面分子与为处理组相比无显著性差异。而DC2.4在感染前后表面分子表达均较低且无显著性差异。结论:1.腺病毒对于原代DC以及DC细胞株均具较高的感染效率,但对于细胞株的感染效率更高;2.腺病毒对r BM-DCs的最适感染复数较DC2.4高,悬浮细胞相对于贴壁细胞较难感染;3.AIRE可以增高负载抗原后的r BM-DCs表面分子CD80、CD83、CD86、CD11c和MHC-II类表达,其中CD86和MHC-II类分子表达显著增高。4.DC2.4细胞株缺乏DC细胞应该表达的各类表面分子,且肿瘤全细胞抗原刺激后表达亦没有显著变化,表明其经过正常细胞永生化处理,且长期传代后存在DC生物学功能的丧失。