超微七味白术散对肠道微生物分子多样性的影响

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目的:研究超微七味白术散疗效的微生态学机理,为超微七味白术散的应用提供实验依据。方法:将70只昆明小鼠随机分为7组,以无菌水做正常组,灌胃氨苄西林、头孢拉定和盐酸林可霉素混合抗生素构建小鼠菌群失调腹泻模型,灌胃七味白术散传统汤剂及超微全量、1/2量、1/4量、1/8量汤剂治疗,通过粪便,肠道内大肠杆菌、乳酸菌及双歧杆菌数量变化评判超微七味白术散的较佳疗效剂量。综合小鼠肠道菌群宏基因组的提取方法,肠道内容物经丙酮洗涤,差速离心,溶菌酶、SDS裂解,CTAB处理,酚/氯仿抽提获得宏基因组DNA,经紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测质量,通过PCR及ARDRA进行评价,建立一种快速有效的肠道宏基因组提取方法。制备菌群失调腹泻小鼠,灌胃超微七味白术散,提取肠道菌群宏基因组,运用ARDRA技术,通过DPS数据处理系统,采用平均连锁聚类分析方法,构建树状聚类图,并计算多样性和相似性,分析超微七味白术散对菌群失调小鼠肠道微生物分子多样性的影响。结果:灌胃七味白术散传统及超微汤剂治疗后,小鼠粪便变干颜色变淡,3天后,传统七味白术散治疗组、超微七味白术散全量及1/2量治疗组腹泻已治愈。肠道内大肠杆菌数量与超微七味白术散剂量呈较明显的正相关性(R2=0.8326)。乳酸菌及和双歧杆菌数量治疗前后变化极明显(p<0.01),且随超微剂量的增大呈先增加后减小的趋势,在超微七味白术散1/2剂量时最大(p<0.01)。经改良的CTAB方法提取的小鼠肠道菌群宏基因组DNA大小在23kb左右,OD260、OD280在1.8-2.0之间,DNA质量较好,能够用于PCR扩增,经细菌通用引物PCR后能得到适用于ARDRA的目的产物。菌群失调腹泻小鼠经超微七味白术散治疗后,肠道菌群16S rDNA酶切条带数由3条增加到5条,但低于正常组(7条)。灌胃超微七味白术散1/2剂量3天后,小鼠肠道内细菌种类的多样陛由0.7324增大到1.2207,与传统七味白术散治疗组相当;与正常组小鼠肠道菌群相似性由40%增加到67%,较传统七味白术散治疗组(50%)高。结论:建立了一种用于PCR分析的小鼠肠道菌群宏基因组提取方法。七味白术散传统及超微汤剂均能调节小鼠肠道微生物,恢复肠道微生物多样性,治愈由抗生素引起的小鼠菌群失调腹泻。超微七味白术散1/2剂量具有七味白术散传统汤剂的疗效,具有节约药材的作用。
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