耐热酶即热稳定性酶,它是一类在高温下仍能保持一定活性的酶的总称。耐热酶不仅具有化学催化剂无法比拟的优点,如催化效率高和底物专一性强,而且酶在高温条件下的稳定性极好。因而它可以克服中温酶(20℃~ 55℃)及低温酶(-2℃~ 20℃)在应用过程中常常出现的生物学性质不稳定的现象,从而使很多高温化学反应过程得以实现。但游离酶只能使用一次即抛弃,而固定化酶作为生物催化剂可多次重复利用、稳定性、操作简单和产物易于分离纯化等优点,因此对其进行固定化研究具有重要意义。论文首先制备包埋载体颗粒,并考察了制备条件对颗粒性质的影响。在此基础上制备出两种凝胶颗粒,海藻酸钙凝胶颗粒和聚乙烯醇凝胶颗粒。通过对两种凝胶颗粒性能的比较,选择了性能较好的海藻酸钙凝胶颗粒作为包埋固定化载体。采用包埋-交联法制备了固定化葡萄糖异构酶,通过单因素实验得出固定化葡萄糖异构酶的较优条件为:酶液与海藻酸钠体积比1∶2混合,戊二醛浓度为0.01%,凝胶浓度为30 g/L,CaCl2浓度为0.2 mol/ L,固定化时间为6 h。通过对不同温度下固定化颗粒酶蛋白变化实验,推断酶蛋白泄漏可能是固定化颗粒使用过程中受温度影响的主要原因。尝试了不同功能基团的树脂进行固定化研究,通过筛选最终选用D380阴离子交换树脂作为固定化载体,采用吸附交联法固定化酶。通过实验对加酶量、交联剂浓度、吸附时间、吸附pH等能够影响固定化酶活力回收率的因素的研究和优化,得出较优的α-淀粉酶固定化条件为:戊二醛浓度0.005 %、处理时间45 min、加酶量3 mg/ g (蛋白量/载体)、酶液pH 5.8、25℃、固定化处理时间为6～10 h,获得的固定化酶活力为80 U/ g (载体)。较优的葡萄糖异构酶固定化条件为:戊二醛浓度0.01 %、处理时间45 min、加酶量10 mg/ g (蛋白量/载体)、酶液pH 7.0、30℃、固定化处理时间为8 h,获得的固定化酶活力为600 U/ g (载体)。研究固定化葡萄糖异构酶的酶学性质,得到其最适温度为90℃,最适pH为7.0,较游离酶有更宽泛的酸碱稳定范围以及热稳定性较高,固定化酶的表观Km为602 mmol/L,比游离酶较大。考察不同底物浓度对葡萄糖转化率的影响,固定化酶重复利用6次,转化率维持在50%。