茭白两种内生真菌分离纯化及培养条件优化

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:caicai_0326
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茭白(Zizania latifolia)为菰属多年生草本植物,是我国第二大水生蔬菜。不仅营养丰富,同时具有保健和药用价值。茭白膨大茎的形成与菰黑粉菌的侵染有密切关系,茭白有正常茭白、灰茭及雄茭三种表型,这三种表型与黑粉菌在茭白体内的生长密切相关。当黑粉菌成功侵染茭白植株后,茭白茎部组织膨大形成肥大的肉质茎,即“正常茭”;如果植株能抵抗菰黑粉菌的侵染,从而开花结实,不长茭白的称之为“雄茭”;若黑粉菌潜育期缩短,形成黑褐色的厚垣孢子堆,使得茭白的肉质茎中充满黑色斑点的则称之为“灰茭”。研究表明,茭白在生产上若连续两年不选种,雄茭、灰茭的发生率将达到30%左右,严重影响农民的经济效益。  本课题以茭白为研究对象,研究茭白内生真菌的种类及其培养条件,主要如下:  (1)采用三点纯化与单孢分离相结合的方法对茭白内生真菌进行分离纯化,再通过分子生物学手段对其内生真菌进行菌丝DNA提取、真菌引物设计、目的片段PCR扩增、目的片段胶回收、T载体连接及相应质粒提取等一系列手段,对所得内生真菌进行鉴定。通过测序得到两个内生真菌长度为:627bp和618bp,测序结果表明,分离的两种内生真菌为毛霉菌和烟管菌。  (2)以茭白内生真菌纯化鉴定为前提,获取毛霉菌纯菌落,对纯化后的茭白毛霉菌的培养条件包括培养基、接种量、pH值、转速、温度、时间进行系统筛选,得出茭白毛霉菌在接种量为3/50ml,pH为6.5,转速为130r/min,温度为28℃的改良马丁培养基中生长良好,且生长到108h时达到最佳水平。  (3)以茭白内生真菌纯化鉴定为前提,获取烟管菌纯菌落,对纯化后的茭白烟管菌的培养条件包括培养基、接种量、pH值、时间进行系统筛选,得出茭白烟管菌在接种量为3/50ml,pH为6.5,转速为130r/min,温度为28℃的PDA培养基中生长良好,且生长到96h时达到最佳水平。
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