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第一部HepaCAM与VEGF在膀胱移行细胞癌中表达的相关性目的:研究膀胱移行细胞癌中肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的相关性及与临床病理参数的关系。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测55例膀胱移行细胞癌癌组织及癌旁组织中hepaCAM和VEGF mRNA的表达。结果:RT-PCR结果显示膀胱移行细胞癌组织中hepaCAM mRNA显著低于癌旁组织(P<0.05); VEGF mRNA显著高于癌旁组织(P<0.05)。hepaCAM,VEGF mRNA与膀胱移行细胞癌的分期有显著相关(P<0.05),与性别、年龄及分级无相关性,且hepaCAM与VEGF mRNA的表达呈负相关(r=-0.277,P<0.05)。结论:膀胱癌组织中hepaCAM基因缺失与VEGF高表达相关,为深入研究hepaCAM参与膀胱移行细胞癌侵袭转移机制奠定了基础。第二部分建立稳定表达hepaCAM基因的膀胱癌细胞株目的:分别建立稳定表达hepaCAM蛋白及绿色荧光蛋白(GFP)的膀胱癌T24,BIU-87细胞株。方法:使用脂质体2000转染法将携带野生型hepaCAM基因的质粒(pEGFPN2-hepaCAM)及空载质粒(pEGFPN2)转染人膀胱癌T24,BIU-87细胞,继续培养48h后,用荧光显微镜观察转染细胞表达的荧光蛋白位置,用含G418培养液筛选稳定表达的细胞。用RT-PCR检测各组转染细胞hepaCAM mRNA的表达。结果:荧光显微镜观察显示:空载质粒转染组T24及BIU-87细胞绿色荧光分布于整个细胞;hepaCAM转染组T24及BIU-87细胞绿色荧光主要分布于胞质和胞核的周围区域及细胞突起部分。RT-PCR检测结果显示:空载体转染组T24及BIU-87细胞无hepaCAM mRNA的表达;hepaCAM转染组T24及BIU-87细胞hepaCAM mRNA均显著高表达。结论:分别成功建立稳定表达hepaCAM及绿色荧光蛋白的T24及BIU-87细胞株,为体外研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞侵袭转移影响奠定试验基础。第三部分hepaCAM与VEGF在膀胱癌细胞株中表达的相关性目的:体外研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞株VEGF表达的影响。方法:用MTT方法检测三组(分别为hepaCAM转染组,空载体转染组及未处理组)细胞的增殖能力;RT-PCR及Western blot方法分别检测三组细胞VEGF mRNA和蛋白的表达。结果:MTT结果显示:与空载体转染组和未处理组相比,野生型hepaCAM稳定转染的T24及BIU-87细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);RT-PCR方法结果显示:与空载体转染组及未处理细胞相比,T24及BIU-87细胞野生型hepaCAM转染组VEGF mRNA的表达下降(P<0.05);Western blot方法显示:T24及BIU-87细胞野生型hepaCAM转染组VEGF蛋白的表达显著低于空载组和未处理组(P<0.05)。结论:转染hepaCAM基因可减弱膀胱癌细胞株T24及BIU-87的增殖能力,可下调VEGF mRNA和蛋白的表达,推测hepaCAM基因可能通过影响VEGF的表达参与膀胱肿瘤侵袭转移。