华支睾吸虫病诊断抗原的筛选、克隆和表达

来源 :中国疾病预防控制中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenquanchenwen
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目的:该研究旨在用新建的华支睾吸虫λZAPⅡcDNA文库筛选特异、敏感的侯选抗原基因,通过克隆和表达获得抗原,并对其免疫诊断价值进行初步评估.方法:1、筛库:用ELISA法选取效价较高的5份华支睾吸虫病患者血清混合制备成筛库血清用以筛选华支睾吸虫cDNA文库,并对获得的阳性克隆进行序列分析;2、克隆表达:将挑选的阳性克隆亚克隆入pET28-b载体,IPTG诱导重组蛋白在BL21(DE3)菌株中表达.3、初步鉴定:用QIAGEN的Ni-NTA Agarose柱亲和层析得到纯蛋白,通过Western blot以及ELISA方法评估表达抗原的免疫诊断价值.结论:以华支睾吸虫病患者的混合血清从华支睾吸虫cDNA文库中筛选获得的两个阳性克隆CS1、CS2在大肠杆菌BL21中成功表达,并且Western blot和ELISA结果表明两种表达蛋白在检测华支睾吸虫病患者血清时具有较好的抗原敏感性和特异性.CS1,CS2基因在国内外尚未见报道,其编码蛋白作为华支睾吸虫病诊断抗原的潜力值得进一步的研究.
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