第一章人脂肪干细胞的体外培养及鉴定　　 目的：原代培养人类脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)，并对其进行鉴定，为下阶段实验作准备。　　 方法：采用胶原酶消化法原代培养人类脂肪干细胞；倒置光学显微镜观察其生长特性，同时结合表面标记的检测及两个方向(成脂、成骨)的定向诱导，对干细胞进行鉴定。　　 结果：原代细胞4～6 h开始贴壁，呈短梭形或小多角形，向外放射状生长，融合后呈编织状或漩涡状排列，流式细胞仪检测表面标记示：CD13、CD44、CD49d、CD105、CD29阳性表达，而CD31、CD106阴性。体外成功进行成脂和成骨诱导。　　 结论：体外成功培养、鉴定人类脂肪干细胞，细胞生长状态良好，为下阶段实验提供了实验材料。　　 第二章异基因脂肪干细胞对活动期SLE患者Th17淋巴细胞的调节　　 背景与目的：干细胞移植在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus，SLE；lupus)治疗中的应用受到人们的关注，并已取得了令人振奋的效果，但机制未明。成人脂肪源间充质干细胞(ADSCs)是一种有前景的免疫治疗种子细胞。Th17细胞是一种新型的CD4+T淋巴细胞亚群，其分泌前炎症因子IL-17发挥强致炎作用，被证实参与SLE的发病。本实验通过体外共培养，观察异基因脂肪干细胞对活动期系统性红斑狼疮患者Th17淋巴细胞亚群数量及功能的影响，为阐明间充质干细胞免疫调节的机制，也为间充质干细胞移植在免疫性疾病治疗中的应用提供实验室依据。　　 方法：招募活动期SLE患者(SLEDAI评分≥10分)10名，抽取外周血5ml，分离外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)，分组分别与第三代及第八代异基因脂肪干细胞共培养48小时，流式细胞仪检测Th17淋巴细胞比例，ELISA检测各组上清中IL-17含量。　　 结果：与对照组相比，两个第三代(P3)脂肪干细胞共培养组中Th17比例和IL-17浓度下降，而八代(P8)脂肪干细胞共培养组却出现相反结果，差异具统计学意义；两个第三代脂肪干细胞共培养组间比较：直接共培养组中Th17比例和IL-17浓度低于Transwell共培养组(P＜0.05)。　　 结论：低代数异基因脂肪干细胞可下调SLE患者外周血Th17细胞比例，抑制其分泌IL-17，而高代数的脂肪干细胞具相反作用。抑制作用与细胞间接触有关。　　 第三章异基因脂肪干细胞抑制SLE患者Th17淋巴细胞机制的探讨　　 背景与目的：上一阶段研究证实：低代数(第三代，P3)异基因脂肪干细胞体外能抑制活动期SLE患者Th17淋巴细胞亚群比例及功能，具备治疗SLE的潜能。作为延续，本实验分析、研究异基因脂肪干细胞对Th17淋巴细胞亚群抑制作用的机制。　　 方法：对P3共培养组及对照组的细胞培养上清和外周血单个核细胞(PBMC)进行分析。ELISA检测上清中IL-23、IL-1β含量；提取PBMC中总RNA，实时定量PCR检测FOXP3、IL-23R、IL-6R、IL-1R mRNA的表达量。　　 结果：与对照组相比，P3共培养组上清中IL-23水平降低，但IL-1β水平升高。P3共培养组IL-23R(IL-23受体)mRNA表达量降低(P＜0.05)，而FOXP3、IL-6R、IL-1R mRNA表达水平与对照组间的差异没统计学意义(P＞0.05)。　　 结论：低代数(P3)ADSCs通过抑制IL-23作用通路(配体及受体)抑制SLE患者外周血Th17淋巴细胞。