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水稻是我国重要的粮食作物,分蘖角度是构成水稻理想株型的主要农艺性状之一,对产量有很大的影响。我们实验室通过图位克隆的方法,分离到了一个控制水稻分蘖角度的基因LAZY1(LA1)。通过转基因研究表明,该基因的表达水平与水稻分蘖角度的大小呈严格的负相关,说明可以通过调节LA1基因的表达有效地控制分蘖角度,显示了LA1在水稻株型分子设计育种中的应用潜力。为研究LA1调控水稻分蘖角度的分子机理及调控网络,本文通过酵母双杂交的方法,筛选了LA1的互作蛋白,并对其功能进行了初步的研究。
利用酵母双杂交的方法,以LA1为饵蛋白,筛选水稻cDNA文库,得到3个LA1互作蛋白(LA1 Interecting Protein,LAIP)。其中,互作蛋白LAIP1和LAIP2高度同源。通过GST-pull down实验证明,全长的LAIP1与LA1在体外存在相互作用。双分子荧光互补(BiFC)实验显示,LA1与LAIP1在水稻细胞内存在相互作用。生化分析表明,LAIP1是一个磷脂酰肌醇结合蛋白。
在酵母细胞中,对LA1蛋白序列上与LAIP1互作的蛋白区间作图分析表明,LA1蛋白C端96个氨基酸足以介导与LAIP1的相互作用。LA1AC96转化水稻原生质体分析表明,与LAIP1互作的LA1蛋白C端96个氨基酸的缺失影响LA1的细胞膜定位模式。将LA1△C96转化水稻la1突变体时,不能恢复其散生表型。这暗示LAIP1蛋白可能通过调控LA1的细胞膜定位而控制水稻的分蘖角度。
将LAIP1过量表达后转化水稻野生型,没有观察到明显的表型。向地性分析表明,LAIP1过量表达导致光下生长的水稻幼苗和暗处生长的胚芽鞘重力反应增强。
通过GST-pull down实验和酵母双杂交的方法证明,LA1能够与另一个互作蛋白LAIP3进行相互作用。双分子荧光互补实验证明,LA1与LAIP3在水稻细胞的细胞膜上存在相互作用。将LAIP3 Motor结构域表达蛋白并进行微管共沉淀实验表明,LIAP3能够结合微管。LAIP3基因过量表达和下调表达的转基因分析还在进行中。