基于MnO2纳米片介导的荧光和比色免疫分析法检测玉米赤霉烯酮的研究

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玉米赤霉烯酮(ZEN)是由镰刀菌属产生的一种次级代谢产物,常见于谷物及其衍生产品中,能造成动物急慢性中毒,引起繁殖机能异常甚至死亡,给畜牧场造成经济损失。由于ZEN的广泛存在及其危害性,亟需开发出简单、灵敏检测ZEN的方法。本文以ZEN作为目标待测物,基于抗原抗体之间的特异性反应构建了三种免疫分析法,实现了对玉米中ZEN的高灵敏检测。主要内容如下:1.间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测ZEN方法的建立利用完全抗原(BSA-ZEN)、单克隆抗体(McAb)以及辣根过氧化物酶标记的抗体(IgG-HRP)构建了检测ZEN的ic-ELISA方法。该方法对ZEN的最低检出限为0.22 ng/m L,检测范围为0.24~0.66 ng/m L。玉米样品的回收率在95.95%~103.91%之间,符合美国分析化学家协会(AOAC)的规定,证明了该方法的准确性和可靠性。2.基于MnO2纳米片触发oxVB1发光的荧光免疫分析法(FLISA)的建立为进一步提高检测方法的灵敏度,将性能良好且化学性质稳定的MnO2纳米片与便宜、易获得的荧光底物VB1结合,构建了基于MnO2纳米片触发ox VB1发光的FLISA方法。所建立的FLISA方法的最低检测限低至15.5 pg/m L,线性范围为100~700 pg/m L。该方法与常规ic-ELISA相比,灵敏度提高了近14倍。实际玉米样品加标回收实验中的回收率在94.24%~108.26%之间,符合AOAC的规定。3.基于MnO2纳米片和7-羟基香豆素的双模式免疫分析法的建立为解决单荧光信号不稳定的问题,基于内过滤效应(IFE)和静态猝灭效应(SQE)以及MnO2纳米片的比色效应,构建了MnO2纳米片和7-羟基香豆素的比色和荧光双模式免疫分析法。比色法对ZEN的最低检测限为0.103 ng/m L,荧光法检测ZEN的最低检测限为0.097 ng/m L。该双模式免疫分析法在ZEN浓度为1~10ng/m L之间呈现出良好的线性关系,实际玉米样品加标回收实验中的回收率在96.65%~139.38%之间,符合AOAC的规定。双模式免疫分析法具有广泛的检测适用性以及检测结果可以相互校准的准确性。本研究所构建的三种免疫分析法均可用于玉米样品中ZEN的灵敏检测,均满足我国国家标准中关于ZEN的最大允许检出浓度的要求。
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