模式生物斑马鱼的基因组中含有30000个基因,与人类的相似度达到87%。斑马鱼血液循环是单循环,心脏主要由一静脉窦、一心房和一心室组成。斑马鱼在心血管、血液、消化道、肝脏、肾脏以及视觉系统与人类相应系统有许多共同点,且具有易饲养、胚胎数量多、完全透明便于观察、发育速度快表型容易鉴定等一系列优点,因此斑马鱼是研究心脏发育的理想模式生物。Pitx1介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化,是左右信号途径最后的靶基因。肌球蛋白轻链调节因子myl7是心脏发育的标志基因,人myl7因与肌节肌厚型心肌病有关。Wnt11是调节心脏发育的非经典wnt信号通路中的关键基因。K1h131参与心脏的发育过程,其功能尚不清楚。目前,在斑马鱼中利用抗体在蛋白水平上阐述基因的表达与功能的研究鲜有报道。本文用PCR技术扩增斑马鱼pitx2、klhl31:和wnt11基因的部分编码区和myl7基因的全长,分别将目的片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒转入BL21感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白,用GST珠亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,另有my]7融合蛋白免疫小白鼠,制备出五种多克隆抗体。Western Blot检测抗体效价分析表明,五种多克隆抗体的效价分别为：pitx2兔抗,1：2000；klhl31兔抗,1：2000；myl7兔抗,1：1500；wnt11兔抗,1：2500；myl7的鼠抗，1：3000。提取成体斑马鱼不同组织蛋白,用多克隆抗体进一步检测pitx2和klhl31蛋白在斑马鱼中的表达情况,发现pitx2蛋白在心脏、脑、肌肉、肠和肝脏组织表达,尤其在心脏中有很高的表达；klhl31蛋白在斑马鱼的心脏、肌肉、肠、眼睛中有表达,在心脏中的表达量最高。胚胎抗体染色分析表明：pitx2蛋白在15体节时体轴的左右两侧不对称表达很明显,22体节时能够清楚地观察到心肌祖细胞的位置,在胚胎发育48h可以观察到pitx2蛋白在心脏中的表达情况。本研究还用制备的鼠抗my17抗体进行48h的胚胎抗体染色实验,观察到该蛋白在心脏中表达。上述研究结果表明,本研究制备的五种斑马鱼多克隆抗体的效价较高,能用于斑马鱼胚胎与组织的蛋白质表达研究,为本室的心脏发育相关基因的功能研究提供了有效的研究手段。