应用秀丽隐杆线虫评价含砷药物毒性及相关试剂盒制备

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本文应用秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,简称C. elegans)检测了As2O3、AS4S4和雄黄浸出液对C. elegans N2的半致死率、生长发育、运动能力、咽泵速率以及Celegans TJ356的DAF-16核转位的影响,对它们的毒性进行了较全面的评价。此外,本文还通过研究染料红四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,简称TTC)对线虫进行染色的条件,建立了鉴别线虫死活的方法。为同时开发相关试剂盒,对线虫的培养和保存条件进行研究,初步探索了一种新型急性毒性检测试剂盒的制备方法。As2O3、AS4S4和RBS对C. elegans L1期幼体的半数致死浓度的测定结果显示,三者毒性大小顺序为As4S4>RBS>As2O3。从对线虫生长发育毒性的实验可知,RBS对线虫体长的影响呈剂量依赖性,高浓度组(砷含量12.8μg/mL)线虫发育明显受抑制,体长只有空白组的56.7%。As203和As4S4对体长影响较小,且高中低浓度之间没有明显区别。三种药物对线虫后代数目影响均不大。从对线虫运动能力毒性的实验可知,与空白组30.5次/min相比,雄黄浸出液处理的线虫头部摆动频率为21.1-23.0次/min, As2O3处理组为22.5-26.1次/min,但高中低浓度之间没有明显差异。而As4S4处理组线虫头部摆动频率为22.1-31.8次/min,高浓度组头部摆动频率明显较空白组低,但中、低组影响不大。从对线虫DAF-16/FOXO核转位的实验可知,As2O3、As4S4和雄黄浸出液均可不同程度引起秀丽隐杆线虫突变株TJ356发生DAF-16核转位,且呈剂量依赖关系。对野生型N2咽泵速率的实验结果显示,与空白组83次/30secs比较,雄黄浸出液和As2O3对线虫咽泵速率影响较明显,分别为66次/30secs和68次/30secs。As4S4处理组线虫咽泵速率变化不大,为79次/secs。总之,线虫的半致死率、生长发育、咽泵速率和突变体TJ356的DAF-16核转位可用于含砷药物的毒性检测,而线虫的运动能力对含砷药物较不敏感。从染料红四氮唑对线虫染色的实验结果可知,染色最佳条件为:温度32℃、4%TTC、染色时间30 min。液体培养线虫的最佳条件为:接菌量0.5g/15mL、线虫1000条,用S液于20℃、130rpm振荡培养至第8天获得的线虫数目最多。线虫保存实验的条件为:线虫10000条/mL、氨苄霉素100μg/mL、温度4℃可保存30天。
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