【摘 要】
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背景:目前90%的临床胰岛移植是经门静脉途径将胰岛移植到肝内。然而,经门静脉途径存在立即血液介导的炎症反应（instant blood-mediated inflammatory reaction,IBMIR）等缺陷,可造成70%的移植物丢失,需获取来自2～4例供者的胰岛,才能使1例受者脱离外源性胰岛素。缺乏能适应临床需求的适宜胰岛移植部位和途径已成为制约胰岛移植发展的瓶颈问题之一,寻找符合生理、
【基金项目】
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辽宁省重点研发计划指导项目（2017225031）；
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背景:目前90%的临床胰岛移植是经门静脉途径将胰岛移植到肝内。然而,经门静脉途径存在立即血液介导的炎症反应（instant blood-mediated inflammatory reaction,IBMIR）等缺陷,可造成70%的移植物丢失,需获取来自2～4例供者的胰岛,才能使1例受者脱离外源性胰岛素。缺乏能适应临床需求的适宜胰岛移植部位和途径已成为制约胰岛移植发展的瓶颈问题之一,寻找符合生理、有利于胰岛移植物存活的较理想移植位点,有望显著提高胰岛移植的效率,是胰岛移植领域亟需解决的关键问题。目的:1、探讨利用去细胞人羊膜（decellularized human amniotic membrane,DAM）在小鼠肝表面构建预血管化窦道（prevascularized sinus tract,PST）作为较理想胰岛移植位点的可行性;2、评估在小鼠肝表面PST内胰岛移植治疗小鼠糖尿病的效果;3、初步探讨丝线异物刺激促进肝表面PST局部血管生成的分子机制。方法:1、采用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导建立糖尿病模型,在小鼠肝表面贴附DAM并临时性（14天）埋植丝线条构造PST;2、通过胶原酶灌注消化获取小鼠胰岛、密度梯度离心结合手捡法纯化胰岛,采用双硫腙（DTZ）染色鉴定胰岛,吖啶橙-溴化乙锭（AO-EB）染色评估胰岛活性。3、通过移植后非禁食血糖值监测和腹腔葡萄糖耐量试验评估胰岛移植物功能;4、通过HE染色、Masson’s染色、免疫组化染色观察PST及胰岛移植物组织形态学特征;5、通过Western Blot检测肝表面PST局部组织血管生成相关蛋白表达变化。结果:1、通过在小鼠肝左叶表面贴附DAM并临时埋植（14天）长约1cm的丝线条可形成内衬肉芽组织的肝表面PST。组织病理染色显示肉芽组织内含大量以中性粒细胞、巨噬细胞为主的炎性细胞及新生毛细血管;2、经胶原酶灌注消化、密度梯度离心结合手捡纯化后,胰岛纯度和活性均＞90%,平均每只小鼠可获得190±32个胰岛。3、在小鼠肝表面PST内移植200个同系胰岛可在平均19.3±3.3天（vs肾被膜下胰岛移植17.9±3.4天,P＞0.05）内逆转糖尿病小鼠血糖,并维持血糖正常＞100天,直至移植物被完整切除,而肝表面一期去细胞人羊膜囊袋（the one-stage decellularized human amniotic pouch,DHAP1）及二期去细胞人羊膜囊袋（the two-stage decellularized human amniotic pouch,DHAP2）内移植200个同系胰岛则不能使受体糖尿病小鼠血糖恢复正常范围;4、PST组小鼠胰岛移植物功能良好,糖耐量曲线下面积为1879.8±126.8 mmol/L/120min（vs肾被膜下胰岛移植组,1802.0±141.6 mmol/L/120min,P＞0.05）,明显小于肝表面DHAP1和DHAP2内移植组及假手术组小鼠（2997.5±174.9 mmol/L/120min,2909.8±147.4mmol/L/120min和3422.7±223.4 mmol/L/120min,P＜0.0001）;5、组织病理显示胰岛移植物在所构建的肝表面PST内存活,胞浆均匀表达胰岛素,局部无明显的炎性细胞浸润。6、经丝线异物刺激后,小鼠肝表面PST局部组织内CD68（+）巨噬细胞所占比例（0.59±0.59%vs 2.07±1.04%,P＜0.01）和CD31（+）血管内皮细胞所占比例（0.68±0.29%vs 3.04±1.05%,P＜0.001）均明显增加,且二者存在Person相关关系（r2=0.7674,P＜0.0001）。7、经丝线异物刺激后,肝表面PST局部组织内HIF-1α、Wnt3a、VEGFA和MMP9等促血管生成相关蛋白表达上调。结论:1、通过在小鼠肝左叶表面贴附DAM并临时埋植丝线条可形成内衬血供丰富肉芽组织的肝表面PST;2、肝表面PST是有利于胰岛移植物存活的较理想胰岛移植位点,肝表面PST内胰岛移植物可有效逆转受体小鼠糖尿病;3、经丝线异物刺激后,小鼠肝表面PST血管密度增加,可能与局部组织内巨噬细胞聚集,HIF-1α、Wnt3a、VEGFA、MMP9等促血管生成相关蛋白表达上调有关。
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