J亚群禽白血病病毒是90年代初由英国鉴定出来的禽白血病病毒ALV新的亚群,主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病.近年来该病毒在世界范围内迅速传播,给各国养禽业带来了巨大的威胁.中国于1999年首先在肉用型鸡群中分离鉴定出了J亚群禽白血病病毒的中国株,随后又分离到很多株,说明J亚群禽白血病在中国已经开始蔓延.该研究利用JL-2病毒株感染CEF成纤维细胞,使病毒繁殖,再利用蛋白酶K消化法提取该病毒的前病毒基因组DNA.根据JL-2病毒株env基因的测序结果,利用Oligo6.0程序设计了一对引物,用以扩增env-gp85基因,并构建了原核表达载体PGEX-6P-1/gp85,在E.coli大肠杆菌BL21中得到高效表达,经薄层扫描分析表达产物量占菌体总蛋白的31.8％.表达的目的蛋白以包涵体的形式存在于菌体蛋白中.利用纯化后的gp85融合蛋白作为抗原,对ELISA工作条件进行标化,并对其相关的特异性、敏感性、重复性等进行研究,建立针对国内ALV-Jgp85的ELISA诊断方法.敏感性实验表明在攻毒后10天即可监测到ALV-J的抗体,直到第85天仍可监测到,并且与国外试剂盒具有很好的符合率.在重复性方面,进行了同一批蛋白的批内与批间重复性试验及不同批次蛋白的重复性试验,结果表明重复性较好.同时用该方法进行了现地应用试验,对某鸡场3个鸡群,鸡群一52只、鸡群二306只、鸡群三92只进行检测,阳性率分别为7.6%、9.8%、59.7%;使用国外ALV-Jgp85试剂盒检测三个鸡群的阳性率分别为6.7%、9.36%、51.6%,两者在三个鸡群中血清检测的符合率分别为89%、95.5%、86.4%.目前已有的研究结果及现地应用效果表明,该研究建立的间接ELISA抗体检测方法,具有特异、敏感、适用、成本合理等特点和优势.随着技术手段的进一步完善、试剂盒组装技术的开发和利用,J亚群禽白血病ELISA诊断方法将为国内各养鸡场有效开展J亚群禽白血病血清学调查提供有效的技术手段.同时,结合相应的病原学诊断方法,该方法也必将在J亚群禽白血病的净化中发挥巨大的作用.