NK-lysin（NKL）是抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）家族中一类重要的短阳离子肽,具有广谱抑菌作用。目前,对鱼类NKL的抗菌活性及作用机制的研究报道较少。本研究从绿鳍马面鲀（Thamnaconus modestus）转录组测序获得了NKL基因（Tm NKL）的c DNA序列。序列分析表明,Tm NKL具有一个由453个核苷酸组成的开放阅读框（open reading frame,ORF）,编码150个氨基酸（amino acids,aa）组成的多肽,包含一个表面活性物质蛋白B（surfactant protein B,SP-B）结构域,其中包含由6个半胱氨酸形成的3对二硫键;Tm NKL与红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）NKL进化关系最近。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）分析显示,Tm NKL基因m RNA在健康绿鳍马面鲀所有被测组织中均表达,在鳃中表达量最高;副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）感染后,其在鳃、头肾和脾中的表达量均显著上调。根据Tm NKL SP-B结构域的40个aa化学合成线性和氧化型的短肽,分别命名为Tm NKLP40L（linear Tm NKLP40）和Tm NKL40O（oxidative Tm NKLP40O）。Tm NKLP40L和Tm NKL40O表现出相同的抑菌谱,对VP、溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）、迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）和哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）4种革兰氏阴性菌均有抑菌活性,最小抑制浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）分别为6.25、12.5、50和50μg/m L。扫描电镜观察发现,Tm NKLP40L和Tm NKLP40O处理的VP形态不完整,膜表面皱缩,有凹陷甚至孔洞形成;透射电镜观察发现,Tm NKLP40L和Tm NKLP40O处理的VP细胞膜明显皱缩,膜质发生分离,膜结构遭到破坏,且内容物出现外泄。通过VP内外膜通透性测定发现,Tm NKLP40L和Tm NKLP40O均可改变VP的OM和IM,使β-半乳糖苷酶从胞质中释放出来,且存在剂量依赖性。流式细胞仪检测发现,VP摄取的PI荧光强度显著增加,异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）标记的Tm NKLP40L和Tm NKLP40O均能内化至胞内。Tm NKLP40L和Tm NKL40O与活VP孵育或与提取的VP基因组DNA（genome DNA,g DNA）直接孵育均能引起VP g DNA水解。进一步研究发现,VP感染绿鳍马面鲀后,腹腔注射1.0μg/g Tm NKLP40L或Tm NKLP40O均能显著提高其存活率,并减少肝、头肾、脾和血液中的载菌量。以上研究结果揭示,Tm NKL首先破坏VP膜的完整性,然后内化至细胞质与g DNA水解来发挥直接的抗菌作用,从而改善绿鳍马面鲀抵抗VP的感染,但二硫键对其抗菌活性无明显影响。研究结果首次深入地揭示了鱼类NKL对VP的抗菌机制,为鱼类细菌性病害防治提供了新思路。