【摘 要】
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PU.1（Purine-rich box1,PU.1）是富含嘌呤盒1转录因子,在单核细胞/巨噬细胞（monocytes/macrophages,MO/MФ）功能的调控中发挥重要作用,但是PU.1在硬骨鱼MO/MФ中的特定功能仍然未知。本研究从香鱼头肾来源的MO/MΦ中克隆获得了两种香鱼PU.1 c DNA序列,命名为PaPU.1a和PaPU.1b。PaPU.1a基因c DNA序列全长由1644个核
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PU.1（Purine-rich box1,PU.1）是富含嘌呤盒1转录因子,在单核细胞/巨噬细胞（monocytes/macrophages,MO/MФ）功能的调控中发挥重要作用,但是PU.1在硬骨鱼MO/MФ中的特定功能仍然未知。本研究从香鱼头肾来源的MO/MΦ中克隆获得了两种香鱼PU.1 c DNA序列,命名为PaPU.1a和PaPU.1b。PaPU.1a基因c DNA序列全长由1644个核苷酸组成,其开放阅读框（open reading frame,ORF）编码了一个262 aa的蛋白,分子质量（molecular mass,MW）为30.71 k Da。PaPU.1b基因c DNA序列全长由1893个核苷酸组成,其ORF编码一个257 aa的蛋白,MW为30.19 k Da。多重序列比对结果表明,PaPU.1a和PaPU.1b的ETS（E-twenty-six）结构域高度保守。实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RT-q PCR）结果显示,在健康香鱼中两种PaPU.1主要在脾脏中表达。在鳗弧菌（Vibrio anguillarum）感染后,肝、脾、头肾和体肾中的PaPU.1a和PaPU.1b的m RNA水平发生改变。蛋白质免疫印迹分析表明,鳗弧菌感染后MO/MФ中PaPU.1a和PaPU.1b蛋白表达上调。免疫荧光结果显示,在静息MO/MФ的细胞核和细胞质中PaPU.1a和PaPU.1b均表达,蛋白质免疫印迹进一步证实了该结果。在鳗弧菌感染MO/MФ后,细胞核中PaPU.1a和PaPU.1b的表达显著增加,细胞质中PaPU.1a和PaPU.1b的表达显著减少,表明在细菌刺激后,MO/MФ中PU.1的表达向细胞核转移。利用RNA干扰的方法敲低PaPU.1a和PaPU.1b,以研究它们在MO/MФ中的功能。RNA干扰效果结果显示,在MO/MФ中PaPU.1a和PaPU.1b在m RNA和蛋白质水平上表达均显著下调。敲低PaPU.1a引起鳗弧菌感染MO/MФ中炎症细胞因子m RNA水平的显著性变化,而敲低PaPU.1b未引起鳗弧菌感染MO/MФ中炎症细胞因子m RNA水平的显著性变化。敲低PaPU.1a和PaPU.1b后均降低了MO/MФ的吞噬活性。此外,敲低PaPU.1b而非PaPU.1a减弱了MO/MФ的呼吸爆发功能和杀菌能力。以上结果表明,两个PaPU.1基因差异调节了香鱼MO/MФ中针对细菌感染的免疫反应。
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