【摘 要】
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研究背景本研究的目的是评估表皮生长因子(EGF)在人类角膜上皮细胞(HCEC)中对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的上皮间质化及细胞运动迁移的影响,并阐明EGF与TGF-β1在角膜上皮
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研究背景本研究的目的是评估表皮生长因子(EGF)在人类角膜上皮细胞(HCEC)中对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的上皮间质化及细胞运动迁移的影响,并阐明EGF与TGF-β1在角膜上皮损伤修复中的共同作用。方法我们用不同浓度的EGF、TGF-β1以及不同的时间处理角膜上皮细胞,分组加入 SB431542(Smad2 抑制剂)、PD98059(ERK 抑制剂)、SB202190(P38 抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)和Wortmannin(AKT抑制剂),分别检测相应的蛋白含量(Western Blot)、RNA水平(RT-PCR)、细胞活力检测(CCK-8)和运动迁移情况(Transwell(?)及细胞划痕试验)。结果经TGF-β1处理后,三种上皮间质化相关蛋白(纤连蛋白、N-钙黏蛋白及E-钙黏蛋白)及相关mRNA水平的变化证明了 TGF-β1可以诱导上皮间质化,且表现出浓度依赖或时间依赖性,并能观察到细胞活力的下降和迁移运动的增加。其中,Smad2和P38的磷酸化是TGF-β1诱导上皮间质化的关键机制。另一方面,EGF抑制了 TGF-β1诱导的上皮间质化,提高了细胞活力。我们发现,尽管上皮间质化被抑制,EGF在存在却增加了细胞的迁移运动,P38信号通路的抑制是这一环节的重要机制。结论我们的实验结果表明,EGF抑制TGF-β1诱导的上皮间质化很可能是通过抑制P38信号通路而实现的,同时通过非上皮间质化途径提高了角膜上皮细胞的增殖和迁移运动。
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