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第1部分肥大细胞与眼眶特发性炎性假瘤纤维化的相关性研究.材料与方法.1.标本来源收集该院2000年9月至2002年6月经住院手术病理确诊为特发性眼眶炎性假瘤的53例患者的病理组织石蜡标本,参照Henderson分类法,根据病理组织中淋巴细胞浸润与纤维化的不同程度,将眼眶炎性假瘤分为3型,即弥漫性淋巴细胞浸润型、混合型和纤维硬化型.其中,淋巴细胞浸润型19例;纤维硬化型22例;混合型12例;以4例正常人眼眶组织标本作为正常对照.所有患者均无其他眼疾.2.方法:应用免疫组织化学技术SABC法对53例特发性眼眶炎性假瘤组织标本及4例正常眼眶组织标本进行肥大细胞特异性标记物类胰蛋白酶单克隆抗体检测,观察肥大细胞浸润数量、分布特点、与胶原纤维的关系以及与IOIP组织纤维化程度的相关性.结论:1.与正常组织标本比较,IOIP组织标本中肥大细胞浸润的数量显著增加;肥大细胞的分布特点提示肥大细胞参与了IOIP组织纤维化的病理过程.2.肥大细胞浸润的数量与IOIP组织标本中的纤维化程度呈高度正相关,肥大细胞可能对眼眶特发性炎性假瘤纤维化的发生、发展有重要的促进作用.第2部分体外培养小鼠骨髓源性肥大细胞与眼眶成纤维细胞共育的实验研究.1.材料与方法.体外分离培养BALB/c小鼠骨髓源性肥大细胞BMMC和同源鼠眼眶成纤维细胞OFB,并进行纯化和鉴定.将两种细胞共育,共育分为2组:两种细胞接触共育组和非接触共育组,对照分为2组:BMMC对照组和OFB对照组;应用光镜、电镜、特殊染色、细胞生长计数及RT-PCR等方法观察共育前后两种细胞的形态学变化、超微结构改变、眼眶成纤维细胞的增殖情况以及4个目的基因(mSCF、C-kit、bFGF和ProcollagenI)在共育前后的表达差异情况.结论:1.肥大细胞对眼眶成纤维细胞的生存和增殖有显著的促进作用,并使其功能活跃,这种作用主要是通过两种细胞间的直接紧密接触而实现的.表明肥大细胞与眼眶成纤维细胞之间的相互作用有其独特的机制,详细机制有待进一步研究.2.肥大细胞与眼眶成纤维细胞通过直接接触共育能够显著上调SCF、C-kit、bFGF和ProcollagenI的表达水平,提示这两种细胞通过相互接触作用刺激纤维化因子的表达增强而参与纤维化的进程.第3部分反义SCF抑制成纤维细胞增殖的实验研究.1.材料与方法.构建正义及反义SCF表达质粒载体,分别转染小鼠胚胎成纤维细(3T3细胞);应用光镜、电镜、特殊染色、细胞生长计数等方法观察两种细胞培养5天后实验各组中BMMC和3T3的增殖情况;应用双抗体夹心ELISA方法在蛋白水平观察实验各组中4个目的因子SCF、CD117(C-kit的蛋白产物)、bFGF和Collagenl(ProcollagenI的蛋白产物)的表达情况.实验分为5组:正义SCF转染共育组、反义SCF转染共育组、未转染共育组、BMMC对照组和3T3对照组.结论:1.在体外实验中,反义SCF转染小鼠成纤维细胞后,可以有效抑制肥大细胞与成纤维细胞之间的相互促进增殖作用,两种细胞的生存和增殖都显著下降.2.在体外肥大细胞与成纤维细胞接触共育体系中,反义SCF转染小鼠成纤维细胞后,与未转染共育组比较,可以在蛋白水平显著抑制bFGF、SCF、CD117和Collagenl的表达,提示反义SCF转染成纤维细胞能够降低小鼠成纤维细胞分泌SCF,抑制了肥大细胞释放活性介质和纤维化细胞因子(如bFGF),从而实现抑制成纤维细胞增殖、胶原合成(CollagenI)和纤维化的进程的目的.反义SCF转染成纤维细胞为IOIP组织纤维化的生物治疗提供了理论依据.