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目的:生物被膜是细菌黏附于接触物表面,由细菌及其分泌的胞外基质形成的微生物群体,是细菌在复杂的自然环境中寻求生存的一种生命现象。本论文拟研究肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia,Mp)生物被膜的形成及其对药物敏感性的影响;内源性和外源性胞内信使分子环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,C-di-GMP)和Mp msb A、cps G、met X、eno和p1基因所编码的蛋白在生物被膜形成中的作用;以初步了解Mp生物被膜形成机制,为进一步阐明Mp的致病机理和耐药机制提供实验依据。方法:24孔板静置培养MpⅠ型标准菌株Mp129和Ⅱ型标准菌株M7,结晶紫染色后用光学显微镜观察生物被膜形成情况,扫描电子显微镜观察生物被膜结构。96孔板倍比稀释法分析56株Mp临床菌株和2株标准菌株生物被膜形成前后对红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星和强力霉素的药物敏感性。静置和振动培养Mp,液相色谱串联质谱法检测内源性C-di-GMP的含量。用不同浓度C-di-GMP处理静置培养的Mp菌株,结晶紫染色后酶标仪检测A570nm值,半定量测定生物被膜的形成量。PCR扩增Mp临床菌株生物被膜相关基因msb A、cps G、met X、eno和p1并测序,用DNAMAN软件将基因序列与Gen Bank上目的基因序列进行比对,分析基因突变与生物被膜形成和Mp药物敏感性之间的相关性。结果1.Mp M129和M7菌株静置培养均可形成生物被膜;2.形成生物被膜后,Mp对红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星和强力霉素的生物膜最小抑菌浓度(MBIC)与最小抑菌浓度(MIC)比值的平均值为3.16、7.80、4.97和3.52;3.Mp形成生物被膜后内源性C-di-GMP量显著升高。M129菌株C-di-GMP蛋白含量在振动培养时为3.36 ng/mg总蛋白,在静置培养后为7.88 ng/mg总蛋白。M7菌株在振动培养时为1.19ng/mg总蛋白,在静置培养后为3.36ng/mg总蛋白;4.外源性C-di-GMP能够抑制Mp生物被膜的形成,200μmol/L C-di-GMP对M7菌株生物被膜的形成量抑制率高达75.46%;5.6株Mp临床株发生了生物被膜相关基因msb A、cps G、met X、eno和p1编码蛋白的突变,突变株生物被膜形成量较未突变株显著降低(P<0.05)。静置培养后非突变株对红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星和强力霉素的MIC改变倍数显著高于突变株(P<0.05)。结论1.Mp生物被膜可降低其对红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星和强力霉素的药物敏感性。2.C-di-GMP和msb A、cps G、met X、eno和P1蛋白可能参与了Mp生物被膜的形成。