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目的:建立固定化木聚糖酶的制备方法,提高木聚糖酶YS1069的稳定性、重复利用率;建立固定化木聚糖酶制备低聚木糖的方法;开展低聚木糖的功效研究;为应用奠定基础。方法:(1)将交联酶聚集体CLEAs技术与载体固定化技术相结合,筛选合适的树脂对木聚糖酶进行固定化,采用单因素法和响应面实验对固载化木糖聚酶CLEAs的制备条件进行优化。(2)研究对比固载化木糖聚酶CLEAs和游离酶的酶学性质。(3)利用固载化木聚糖酶CLEAs制备低聚木糖,采用单因素法和响应面实验对制备条件进行优化,高效液相法分析低聚木糖的成分。(4)复制氧化型低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化损伤模型,研究低聚木糖的抗氧化活性。实验设计分五组:正常对照组、ox-LDL模型组、低聚木糖组(5,10,20mg/m L);酶化学方法检测各组中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果:(1)固载化木聚糖酶CLEAs的最佳制备条件:LKZ-218树脂为载体,酶液的p H为9.0,沉淀剂为2m L的异丙醇,沉淀时间为1h,交联剂的浓度为1.59g/L,交联时间为2h,固定化时间为9.25h,固定化温度为20℃,加酶量为8mg,此条件下制备的固载化木聚糖酶CLEAs的回收率达到65.63%,并且载酶量最高达到190U/g。(2)通过研究其酶学性质得出固载化木聚糖酶CLEAs的最适作用温度比游离酶高10℃,达到65℃;最适作用p H没有改变;p H稳定性和耐热性均得到提高;固载化木聚糖酶CLEAs在重复使用10次后,其相对酶活仍为42.3%;储存12周后游离酶的相对酶活为12%,而固载化木聚糖酶CLEAs的相对酶活仍为47%;固载化木聚糖酶CLEAs在有机试剂、表面活性剂和金属离子溶液中处理一段时间后酶活损失比游离酶少,稳定性显著提高;研究酶促反应动力学参数得出:固载化木聚糖酶CLEAs的Km为9.6 g/L,Vmax为4.0 mmol/L/min;游离酶的Km为9.1 g/L,Vmax为6.2 mmol/L/min。(3)固载化木聚糖酶CLEAs制备低聚木糖的最佳条件为:底物的浓度52.5g/L,酶解时间3h,酶解温度57℃,p H 9,加酶量0.2g/g。HPLC分析低聚木糖的组分得出酶解产物中包括木糖、木二糖、木三糖等低聚木糖,并且木二糖的含量最多。(4)酶化学方法检测低聚木糖的抗氧化活性表明:与正常组相比,模型组中GSH-PX、SOD活性明显降低;而预先给予不同浓度低聚木糖预处理后,GSH-PX、SOD的活性随着剂量的增加而增大(与模型组相比,P<0.05)。结论:将交联酶聚集体CLEAs技术与载体固定化技术相结合制备的固载化木聚糖酶CLEAs回收率达到65.63%,载酶量达到190U/g。木聚糖酶经过固定化之后其稳定性显著提高。利用固载化木聚糖酶CLEAs制备的低聚木糖主要成分为木二糖,并且具有一定的抗氧化活性。