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研究背景:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是一类起源于造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)的恶性增殖性疾病,病情凶险,易复发,具有严重致死性,其发病率逐年上升。AML的常用治疗方法有联合化疗、诱导分化和HSCs移植等方法,但AML的治疗效果仍然不够理想。虽然近年来兴起的细胞疗法与免疫疗法在淋系白血病的治疗中取得了较好的成果,但其对AML的治疗效果有限,AML患者受益甚少。诸多学者已证实白血病干细胞(Leukemia stem cells,LSCs)对AML发生及复发起着至关重要的作用。因此,探索新的LSCs分子靶点对AML的控制和治疗十分必要。研究发现细胞表面分子可用于鉴别HSCs与LSCs,监控肿瘤细胞动态变化,亦可作为靶向治疗的靶点,具有重要应用价值。我们在前期研究中首次发现,C型凝集素域7家族成员A(C-Type Lectin Domain Containing 7A,CLEC7A)在正常HSCs中不表达或弱表达而在AML LSCs中高表达,这提示CLEC7A与AML LSCs的相关性以及鉴定LSCs的特异性细胞表面分子的客观可能性。研究目的:在前期研究的基础上,以LSCs中高表达的CLEC7A为切入点,对其在AML细胞中的影响进行研究,为AML的治疗和判断预后提供理论依据。研究方法:(1)明确CLEC7A在LSCs中的特异性:使用生物信息学的方法分析正常CD34~+CD38~-HSCs与AML LSCs之间的基因表达差异,确定CLEC7A在LSCs中的表达特异性;(2)探讨敲降CLEC7A对AML细胞的影响:构建CLEC7A质粒,转染AML细胞。合成三对靶向CLEC7A的特异性干扰序列(分别为shRNA1,shRNA2,shRNA3)及一对非特异性干扰序列(shRNA0),慢病毒转染THP-1和U937细胞。病毒颗粒标记绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP),转染72 h后用流式细胞仪分选GFP~+细胞检测敲降CLEC7A对AML细胞增殖、分化及凋亡的影响;(3)研究CLEC7A在AML发展过程中的作用机制:蛋白免疫印迹法检测敲降CLEC7A对AML细胞增殖分化相关的ERK1/2(Extracellular regulated protein kinases 1/2)信号途径及凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase 3表达的影响。研究结果:(1)通过数据库对比分析发现CLEC7A在各对比基因中表达较为突出,且CLEC7A在LSCs中的表达显著高于正常HSCs;(2)通过对AML细胞系THP-1和U937慢病毒转染shCLEC7A后发现与Scramble对照组相比敲降CLEC7A组的细胞增殖能力显著降低,CFU形成能力减弱,且敲降CLEC7A组U937细胞CD19和CD11b表达量升高,THP-1细胞CD3和CD11b出现表达上升现象,以上结果表明敲降CLEC7A后可抑制THP-1和U937细胞的增殖,降低其CFU形成能力并促进细胞分化;(3)蛋白免疫印迹结果发现,与Scramble对照组相比敲降CLEC7A组细胞内磷酸化形式的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达明显降低,活化形式的Caspase 3蛋白表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低和促凋亡蛋白Bax的表达升高。以上结果表明敲降CLEC7A可抑制AML细胞增殖信号途径中ERK1/2的磷酸化水平并促进细胞凋亡。结论:CLEC7A作为C型凝集素域7家族成员A蛋白在LSCs中特异性高表达,敲降CLEC7A可抑制AML细胞的增殖,降低AML细胞的CFU形成能力,促进AML细胞的分化和凋亡。我们的结果有望为AML的靶向治疗提供新的理论依据和实验指导。