绵羊肺腺瘤病(sheep pulmonary adenomatosis ,SPA)是由β-反转录病毒属,绵羊肺腺瘤病病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的一种肺肿瘤性疾病,世界动物卫生组织将其列为B类传染病。为了进一步研究JSRV的致病机制及建立快速诊断SPA的方法,本研究将本室保存的重组质粒pGEX-4T-1-SU转化E.coli BL21,经表达纯化后作为免疫原,免疫6-8周龄BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。运用间接ELISA方法,以纯化后的pGEX-4T-1-SU重组蛋白及表达载体pGEX-4T-1标签蛋白GST为检测抗原同时对杂交瘤上清进行初步筛选,得到三株针对目的蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1D6、3B3、3D6。为了得到针对天然蛋白的单克隆抗体,以重组质粒pGEX-4T-1-SU为模板,克隆构建SU基因的重组真核表达载体SU-HA-pcDNA3.1(+),并通过脂质体转染使其在真核A-549细胞中得以表达,得到接近天然蛋白的真核表达蛋白。以此为检测抗原,经间接免疫荧光法对所得三株阳性杂交瘤细胞进行第二次检测,结果显示1D6、3B3、3D6均为阳性。因此说明本实验最终获得了3株能够识别SU天然蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞,并已成功地建立了JSRV-NM株SU蛋白的具有很好的特异性及稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。本项研究为今后建立更为灵敏的检测SPA病原的特异性诊断方法,对SPA发病机理的研究及分析JSRV SU蛋白的功能等奠定重要基础。同时对保障我国种羊业的战略安全以及对养羊业的健康发展,具有重要的学术意义和实用价值。