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昆虫先天免疫的主要通过Toll和IMD通路应答微生物的感染，诱导抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)的表达。近来有报道在双翅目昆虫果蝇(Drosophilamelanogaster)，非感染条件下的饥饿处理降低类胰岛素(Insulin-like signaling，ILS)信号水平，最终激活FoxO转录因子(Fork-head box O transcript factor)，启动drosomycin等抗菌肽基因的表达。家蚕(Bombyx mori)作为鳞翅目昆虫的模式生物，是否也存在相似的途径调控?还没有明确报道。 本论文的研究包括两个问题：第一：饥饿条件下，家蚕抗菌肽基因是否有明显应答?第二：如果抗菌肽基因有明显应答，它是否通过FoxO转录因子启动抗菌肽的表达?由此设计本论文的研究内容：(1)对家蚕五龄第三天幼虫进行不同时间段饥饿处理后，用抑菌曲线法检测家蚕血淋巴的抑菌活性；(2)利用qRT-PCR检测7个抗菌肽基因(BmcecB6，Bmmor，Bmglv2，Bmattal，Bmleb3，BmdefA，BmdefB)在脂肪体中对饥饿诱导的响应，筛选出应答较强的靶基因，同时在家蚕Bm-12细胞进行验证；(3)对饥饿上调表达的抗菌肽靶基因，检索其上游序列是否有转录因子FoxO结合位点，克隆缺失FoxO位点的靶基因上游调控序列，构建双荧光素酶重组质粒，转染Bm-12细胞，进行双荧光素酶报告检测实验，获得的主要结果如下： 1.饥饿处理家蚕五龄三天幼虫不同时间，取血淋巴进行抑菌活性实验，结果表明：饥饿24h后的血淋巴开始出现对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli K12D31)的抑菌活性，饥饿36h和48h的抑菌活性存在显著性差异；饥饿处理组血淋巴对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)却没有抑菌作用。 2.对7个抗菌肽靶基因进行荧光定量PCR检测的结果显示，饥饿虫体后血淋巴样品的BmdefB表达被明显上调，其它基因应答较弱；饥饿处理的Bm-12细胞检测也证实BmdefB表达被明显被上调。 3.检索BmdefB起始密码子ATG上游1286bp的调控序列，找到完全匹配的5个FoxO结合位点。通过重叠PCR的方法，克隆获得依次连续删除这5个FoxO位点(DefB-△1、DefB-△1，2、DefB-△1，2，3、DefB-△1，2，3，4和DefB-△1-5)的BmdefB上游启动序列。 4.分别将缺失型BmdefB上游调控序列和野生型BmdefB上游调控序列分别插入荧光素酶报告质粒PGL3-Basic，构建萤火虫荧光素酶重组报告质粒，用海肾荧光素酶重组质粒pRL-Null-Actin5做内参对照，共转染家蚕Bm-12细胞，进行体外培养，用PBS饥饿处理后，进行双荧光素酶报告检测实验。初步结果表明在饥饿条件下，FoxO介导了抗菌肽基因BmdefB的表达，靠近起始密码子上游第1和第3个FoxO位点具有启动子活性。 本实验结果初步证实饥饿通过FoxO转录因子诱导了家蚕抗菌肽基因BmdefB的表达。