弓形虫病（Toxoplasmosis）是由弓形虫（Toxoplasma gondii）引发的人兽共患的寄生虫病，它可感染人类和多种哺乳动物，呈世界范围分布，严重危害人类健康和畜牧业的发展。人类可通过食入未煮熟或含有组织囊肿或卵囊污染的食物感染弓形虫。牛感染弓形虫后所携带囊肿组织将会传播给人类，因此准确的检测牛感染弓形虫的情况具有重要的公共卫生意义。弓形虫致密颗粒蛋白（GRAs）为一类分泌型蛋白，它是潜在的弓形虫病诊断抗原。通过cDNA文库免疫筛选的鉴定，GRA7是弓形虫致密颗粒蛋白家族中的一员，基因全长750bp，可作为血清学诊断弓形虫病的标志物。弓形虫GRA7基因原核表达与纯化将GenBank已发表的弓形虫GRA7序列去除信号肽后设计并合成一对特异性引物，通过RT-PCR技术扩增弓形虫GRA7基因，结果获得一条675bp目的片段，将此片段克隆到T载体，经酶切鉴定和测序分析筛选，结果与已公布的弓形虫GRA7基因序列同源性为100%。构建原核表达载体pET-28a-GRA7，转化大肠杆菌，IPTG诱导，经SDS-PAGE和Western blotting分析，重组GRA7分子量为27kDa。应用Ni-NTA对表达蛋白进行纯化，重组GRA7浓度达0.6mg/ml。弓形虫ELISA检测方法建立应用纯化的重组GRA7蛋白为抗原包被酶标板，建立了弓形虫牛血清ELISA检测方法，最佳抗原包被浓度为5μg/ml、血清最佳稀释度为1:100，封闭液为5%脱脂奶粉，二抗最佳工作浓度为1:20000，TMB显色的最佳时间为20min。将血清稀释至1:12800，可以检测出弓形虫阳性，批内、批间重复性变异系数均值分别为4.70%、3.51%，小于8%，说明该法灵敏度高，重复性好。应用该方法检测牛带绦虫、肉孢子虫、包虫和牛弓形虫阳性血清，结果表明该ELISA检测方法与其他牛寄生虫病阳性血清无交叉反应，具有良好的特异性。用建立的ELISA方法检测100份牛血清，将其与Dot-blot检测结果进行比较，符合率达到92%。本研究建立的ELISA检测方法为试剂盒的开发奠定前期基础，为我国牛弓形虫病的诊断提供技术手段。