“杨梅霜”病是古田县银耳生产中经常发生的一种病害,该病发生时银耳菌袋接种穴处不产生或产生较少的白毛团,银耳菌丝以及其伴生菌-香灰菌均死亡,而接种穴以外的香灰菌生长得特别旺盛,接种穴的外观如同杨梅霜。该病可造成银耳产量下降,对银耳生产十分不利。目前关于“杨梅霜”病的研究很少,病害发生的原因、传播途径还不清楚,给病害的防治工作带来了极大困难。针对“杨梅霜”病,本课题主要进行了病原菌的分离与回接验证、致病原因、病原菌鉴定、抗菌活性、发酵条件优化、发酵产物稳定性研究,结果如下：1.利用稀释平板法从福建省古田县采集的发病银耳菌袋中分离到3株放线菌,分别命名为Js-1T、Js-2、Js-3。经在PDA平板培养后,发现它们的菌落特征和培养特性相同；用限制性内切酶PST Ⅰ和ECORV对3株菌的16S rDNA进行酶切分析,结果它们产生的DNA带型完全一致,表明Js-1T、Js-2、Js-3为重复菌株。根据柯赫氏法则的原理,采用注射法将Js-1T菌株回接入刚完成接种的银耳菌袋,发现回接菌筒发病症状与“杨梅霜”病一致,并从中重新分离到了与Js-1T菌株相同的纯培养物,初步断定Js-1T菌株为“杨梅霜”病的病原菌。Js-1T菌株与香灰菌和银耳芽孢对峙培养时,香灰菌和银耳芽孢的生长受到明显抑制,因此推断“杨梅霜”病的发病原因为：Js-1T菌株产生的抗菌物质抑制了香灰菌和银耳菌丝的生长。2.对Js-1T菌株进行了多相分类鉴定：(1) 16S rDNA序列分析表明,Js-1T菌株与链霉菌属菌株的16S rDNA同源性较高,但除Streptomyces albus subsp.pathocidicus strain NBRC 13812T (97.54%)、Streptomyces hebeiensis strain NBRC 101006T (97.62%)、Streptomyces hebeiensis strain YIM001T (97.58%)以外与其它菌株的同源性均低于97%。Js-1T菌株在用MEGA 5.0软件的Neighbor-Joining法构建的进化树上与链霉菌属的相关种聚为一类,并且位于单独的分支上面,因此推测Js-1T菌株为链霉菌属的一个新种。(2)Js-1T菌株在PDA培养基上菌落呈同心环状,气生菌丝白色,基内菌丝高度分支,无横隔,不断裂；气生菌丝可分化出孢子丝；孢子丝由10个以上孢子组成,直至弯曲状；孢子圆柱状,不游动,表面光滑稍有凹陷,长度0.5-0.8μm。在葡萄糖马铃薯培养基、ISP2、ISP3、ISP5、葡萄糖酵母膏培养基、葡萄糖天门冬素培养基上面生长良好,但在高氏一号培养基、ISP4培养基上生长不好,可在PDA、ISP2、ISP5上产生可溶性色素。(3)Js-1T菌株可以在15-40℃条件下生长,不能在10℃或45℃生长；生长pH范围为5-10;NaCl耐受性低于7%；可以利用阿拉伯糖、果糖、甘露糖、麦芽糖、葡萄糖作为唯一碳源进行生长,不能利用蔗糖、肌醇、棉籽糖、山梨醇进行生长。不能在酪氨酸培养基上产生黑色素,不能水解淀粉、纤维素,可以使明胶液化、牛奶凝固与胨化,接触酶阳性,利用葡萄糖不产酸。Js-1T菌株的生理生化特征与Streptomyces albus subsp.pathocidicus和Streptomyces hebeiensis以及其他同源性较高的种存在差异。(4)Js-1T菌株细胞的主要脂肪酸为：(18:1 w6c| 18:1 w7c) (80.60%),16:0 (7.02%),16:0iso (2.63%)、15:0 iso (2.34%),15:0 anteiso (1.37%).(5)Js-1T菌株的基因组(G+C)mol%为70.1%。DNA-DNA体外杂交表明Js-1T与Streptomyces albus subsp.pathocidicus模式菌株CGMCC 4.1633的同源性为35.4%,与Streptomyces hebeiensis YIM001T的同源性为47.2%。多相分类结果表明,菌株Js-1T为链霉菌属的一个新种,命名为Streptomyces fujianensis sp. nov.,保藏于中国典型培养物保藏中心(=CCTCC M 2011365T)。3.测定了Js-1T菌株的抗菌活性。Js-1T对细菌大肠杆菌的抑菌圈直径为2.76cm,对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为1.26cm；对真菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、有害疣孢霉菌(Mycogone perniciosa)、稻瘟菌(Pyricularia grisea)、木霉(Trichoderma viride)、根霉(Rhizopus stolonir)的抑菌圈直径分别为4.29cm、 4.07cm、3.85cm、3.37cm、2.90cm。此外,对酵母(Yeast)、镰刀菌(Fusarium spp)、香蕉枯萎病菌天蓝一号(Banana vasicular wilt)也具有抑制作用。Js-1T菌株发酵液对杏鲍菇(Pleurotus eryngii)、草菇(Volvariella volvacea)、金针菇(Flammulina velutipes)、香菇(Lentinual edodes)和双孢蘑菇(Agaricus bisporus)的菌丝有抑制作用。4.初步研究了Js-1T菌株的发酵条件。单因素实验结果表明,Js-1T菌株发酵的最佳碳源为麦芽糖(25.0g/L)、最佳氮源为KNO3 (2.0g/L);发酵条件的单因素和正交实验表明,最佳发酵条件为：温度28℃,pH 7,250ml三角瓶装液量100ml。浓缩2倍的发酵液与添加60μl (100ml PDA中)潮霉素对有害疣孢霉菌(Mycogone perniciosa)的抑菌率效果相仿,浓缩5倍的发酵液对有害疣孢霉菌(Mycogone perniciosa)的抑菌效果优于添加100μl潮霉素。5.Js-1T菌株的发酵液具有很好的热稳定性,经高压灭菌处理(121℃,20min)后活性仅下降了11%;但是,发酵液对酸碱较敏感,在酸、碱环境中易失活。