西瓜上黄瓜绿斑驳花叶病毒检测及分析

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黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)是危害葫芦科作物的重要病原物之一。该病毒严重危害西瓜、黄瓜、甜瓜等作物的果实,一旦爆发,会导致农作物减产,甚至绝收。2011年5月调查发现,湖南省邵阳县西瓜田中发现疑似CGMMV侵染的西瓜病株,经RT-PCR检测及测序证实病原物确为CGMMV。为了进一步分析湖南省CGMMV的来源、传播及与砧木种子传毒的关系,笔者对湖南生产商在湘销售的产自新疆吐鲁番、甘肃张掖、陕西榆林、湖南常德四大制种基地2011年生产的西瓜砧木种子样本做了RT-PCR检测,对PCR产物测序并进行了生物信息学分析。创新点及研究结果如下:(1)通过RT-PCR方法检测,首次发现湖南省西瓜上出现CGMMVo通过对CGMMV-SY分离物和CGMMV-JX分离物保守区CP基因苷酸序列的比对分析,结合“京欣砧王”的育种地和CGMMV在我国发生的先后顺序,初步推测该病毒很有可能先从韩国传入我国辽宁,然后随带毒种子尤其是砧木种子调运传到湖南省。(2)设计了一对CGMMV特异的引物,初步建立了一种针对种子携带CGMMV的RT-PCR检测方法。这为检疫部门对种质资源中CGMMV的快速检测提供一定的参考。(3)首次发现新疆和陕西所产西瓜砧木种子带有黄瓜绿斑驳花叶病毒。首次对新疆吐鲁番、甘肃张掖、陕西榆林和湖南常德四大砧木产区砧木种子带毒情况进行了RT-PCR检测。结果显示检测的砧木样本不但存在携带CGMMV的情况,且样本总带毒率高达80.60%。该结果进一步验证了嫁接砧木传播CGMMV的假设,为西瓜等作物的种植及CGMMV的防治工作提供一定的参考价值。。(4)对不同产地砧木种子的CGMMV分离物进行了生物信息学分析。对新疆吐鲁番、甘肃张掖、陕西榆林和湖南常德等地的CGMMV分离物的CP基因和MP基因序列的分析结果中,8条序列中7条核苷酸序列完全相同,只有CGMMV-HunanCD1与其他7条序列共存在4个碱基的微小差异。基于CP基因和MP基因构建的系统发育树,支持了湖南省首次发现的CGMMV分离物主要是由韩国传入我国辽宁地区的CGMMV分离物随砧木种子调运传入湖南的推测。我国各地爆发的CGMMV可能来自于亚洲的多个国家和地区,这与我国从这些地区引种密不可分,为研究CGMMV在我国各地的发生和传播提供了一定的参考价值。对本研究中CGMMV核苷酸序列翻译形成的氨基酸序列构成的CP蛋白和MP蛋白的疏水性、卷曲螺旋、和磷酸化位点的预测,对进一步研究这些蛋白的结构和功能有重要的参考价值。本研究包含了对CGMMV检测和传播的相关研究:首次用RT-PCR方法在湖南省西瓜以及新疆、陕西所产砧木种子中发现了CGMMV;设计了一对CGMMV的特异性PT-PCR引物并获得国家发明专利授权,建立了快速批量检测种子中CGMMV的方法,为检疫部门对种质资源中CGMMV的检测提供了重要参考价值。
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