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本研究采用生物活性追踪法,对22种植物的活性成分进行筛选,最终确定以香樟树(Cinnamomumcamphora)的叶片作为研究对象。通过对粗提物的生物活性测定,证明香樟树叶含有对植物病原菌具有生物活性的成分,通过进一步的分离,纯化,最终得到活性化合物A,并通过1H-NMR和13C-NMR对其进行了结构鉴定。本研究主要取得了如下结果:
1.用生长速率法测定了22种植物乙醇提取物的抑菌活性。结果表明:在浓度为40mg/ml时,不同植物的乙醇提取物对这4种植物病原菌的抑制作用有明显差别,其中香樟树、山麦冬、元宝槭、地笋、浒苔、鸡爪槭、鹅掌楸、黄麻和黑松对苹果腐烂病菌抑制率均达到80%以上。
2.以活性较高的香樟树叶和鹅掌楸叶乙醇提取物对另外11种植物病原菌进行活性测定。结果表明,香樟树叶的乙醇提取物对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌、番茄绵疫病菌和小麦纹枯病菌的抑制效果较好;鹅掌楸叶的乙醇提取物对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌和小麦赤霉病菌的抑制效果较好。以香樟树叶为研究材料,进行进一步的研究。
3.将香樟树叶乙醇提取物加水制成悬浮液后,用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,并以苹果腐烂病菌、番茄绵疫病菌、葡萄白腐病菌和灰霉病菌作为供试病菌,分别对石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水分散层进行生物活性测定,在萃取浓度为2mg/mL时,乙酸乙酯萃取层对四种病原菌的抑制率分别为88.2%、76.4%、46.25、25.4%,均明显高于其他三个萃取相。
4.对乙酸乙酯萃取层进一步进行硅胶柱层析,得到了32个馏分,以苹果腐烂病为测试菌种对各馏分进行活性测定,其中馏分5号对苹果腐烂病菌的抑制作用最好,在1mg/mL时抑制率达到54.3%。
5.对5号馏分进一步的分离纯化,得到化合物A,在1mg/mL时对苹果腐烂病菌的抑制率达50.34%,EC50为0.96mg/mL。通过光谱鉴定,化合物A为8-苯甲酰-7-丁基2,3-咪唑-[1,2-a]并吡啶5(1H)-1.