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花刺参（Stichopus monotuberculatus）属于海参纲(Holothuroidea)、檐手目(Aspidochirotida)、刺参科(Stichopodidae)、刺参属（Stichopus），是一种具有食用价值的热带经济海参种类。黑海参（Holothuria atra）属于海参纲(Holothuroidea)、楣手目(Aspidochirotida)、海参科(Holothuriidae)、海参属（Holothuria），是一种具有药用和生态价值的热带海参种类。 α2-巨球蛋白(alpha-2-macroglobulin，α2M)是一种广泛存在于脊椎动物和无脊椎动物中的大分子糖蛋白，除具有蛋白酶抑制活性外，还参与结合受体、细胞因子和免疫防御反应等多种生理功能。 本研究利用同源克隆和RACE技术，分别从花刺参和黑海参肠中克隆到α2M基因全长cDNA序列;分别采用半定量和定量PCR方法检测花刺参和黑海参各组织中α2M基因表达;采用定量PCR技术和α2M蛋白活性检测方法分别检测免疫刺激物或灭活的病原菌对两种海参免疫组织中α2M基因表达和体腔液中α2M蛋白活性;通过体腔注射活的副溶血弧菌，研究黑海参在活病原菌刺激下其体腔细胞α2M基因表达和体腔液中酚氧化酶活性变化;利用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术证实α2M基因参与黑海参体液免疫防御反应。主要研究结果如下: 1.分别克隆了花刺参和黑海参肠中的α2M全长cDNA序列，分别命名为Stmα2M和HaA2M。Stmα2M cDNA全长5，276bp，其中5非编码区为279bp、3非编码区为344bp、开放阅读框为4，653bp，编码一个含1，550个氨基酸的蛋白;Stmα2M蛋白含有信号肽和8个潜在的N-Linked糖基化位点。HaA2M cDNA全长5，194bp，其中5非编码区为213bp、3非编码区为316bp、开放阅读框为4，665bp，编码一个含1，554个氨基酸的蛋白;HaA2M氨基酸序列中含有7个潜在的N-Linked糖基化位点。Stmα2M和HaA2M存在保守的诱饵区(Bait region domain)、内部硫酯键区(Thiolester domain)和受体结合区（Receptor-binding domain）功能结构域。 2.Stmα2M基因在花刺参肠、呼吸树和体腔细胞中表达量较高，在体壁中表达量较低;HaA2M基因在黑海参体腔细胞、体壁和肠中表达量较高，在呼吸树中表达量较低。 3.Stmα2M基因对Lipopolysaccharide(LPS)和Polyriboinosinicpolyribocytidylic acid[Poly(I∶C)]分别在12h和24h时存在最强的免疫应答。 HaA2M基因对灭活的溶藻弧菌和Poly(I∶C)分别在12h和24h时存在最强的免疫应答。 4.α2M活性检测结果表明，花刺参Stmα2M和黑海参HaA2M的蛋白活性在1～40min内都会显著地下降，而在40min后基本达到稳定。 Stmα2M蛋白活性对LPS和Poly(I∶C)在6h时存在最强的免疫应答;HaA2M蛋白活性对灭活的溶藻弧菌和Poly(I∶C)在12h和24h时存在最强的免疫应答。 5.黑海参体腔细胞中HaA2M基因对副溶血弧菌在1h和12h时存在最强的免疫应答;而其体腔液中的酚氧化酶活性在1h、24h和48h时应答最强烈。 此外，HaA2M基因沉默导致了黑海参的体腔细胞数量、HaA2M mRNA表达和酚氧化酶活性分别降低了50％、90％和43％，同时黑海参体腔清除副溶血弧菌的能力也降低了130％。