新疆驴发情周期内卵泡生长发育规律的研究

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目的:驴属于季节性发情动物,其繁殖力较低,妊娠期周期较长,平均为360天,一般3年2胎。驴的发情持续时间也长,优势卵泡大且数天不破裂,优势卵泡内颗粒细胞分泌的雌激素引起连续5-7天的发情症状,这使得生产中很难准确判断驴的排卵、配种及输精的时间,导致驴受胎率较低,养殖收益较慢。若能了解母驴在发情周期内卵泡发育和黄体形成的变化规律,则可确定排卵间隔和时间,以便实施自然交配或人工授精,以减少空怀天数,提高母驴的繁殖能力。因此,本研究通过兽用B超直肠检测新疆驴发情周期内卵泡及黄体的发育动态;通过ELISA测定发情周期内血清中FSH、LH、E2、P4这4种生殖激素浓度变化;通过RT-q PCR测定与卵泡发育相关基因对新疆驴卵泡发育的影响。方法:(1)本试验在发情季节选取健康无生殖疾病的经产新疆母驴10头,每天定时用B超检测卵巢双侧卵泡大小、数目的变化及黄体生长与退化情况;B超结合肉眼观察判断母驴出现发情症状后何时排卵。(2)每日定时在母驴颈静脉,用一次性真空采血管采集10 m L血液,离心、分装于1.5 m L离心管,用ELISA试剂盒检测生殖激素FSH、LH、E2、P4浓度,绘制激素变化曲线图;(3)通过活体采卵与离体卵巢抽吸法,采集卵泡直径大于30 mm大卵泡与直径20 mm以下小卵泡中的卵泡液,离心获得卵泡颗粒细胞,荧光定量PCR对比分析大、小卵泡颗粒细胞中,与卵泡发育相关基因(FSHR、EGF、BCL2、BAX、CXCR4、St AR、CPEB1、PRKAG2和AMH)的表达差异。结果:(1)新疆驴的发情周期(排卵当天计为0天)平均为22.7±1.49天,发情周期第1天最大卵泡直径为9.3±0.7 mm;此时卵泡数目也最多6.8±0.8个;随着卵泡不断发育,在第13天时,最大卵泡直径达到25.5±1.3 mm;卵泡个数则下降为4.66±0.7个;在排卵前5-7天时,母驴出现发情症状,此时优势卵泡进入快速生长阶段,其直径平均以3.0±2.2 mm/d速度快速生长直至最大卵泡直径达40.7±1.8 mm破裂排卵。新疆驴排卵之后黄体随即出现,到排卵后第15天黄体生长发育至最大,其直径为30.5±3.5 mm,之后黄体开始快速退化。新疆驴从出现发情行为到排卵的时间一般为2-9天,69%母驴为4-6天。(2)母驴发情周期内,FSH血清浓度会出现两个波峰和一个波谷其浓度分别为5.45±0.29 m IU/m L、5.24±0.31m IU/m L、3.61±0.18 m IU/m L。LH在排卵前达到最大值16.48±1.22 m IU/m L。当母驴开始发情时,E2含量快速上升,排卵前2天达到峰值65.83±3.25 pg/m L。P4含量在排卵后第15天到达峰值50.06±4.5 ng/m L。(3)与卵泡发育的相关基因中,BAX、FSHR、CXCR4、STAR、PRKAG2基因在新疆驴大卵泡中表达量较高;CPEB1、AMH、BCL2基因在新疆驴小卵泡中表达量较高。结论:(1)新疆驴发情周期为22.7±1.49天,排卵时最大卵泡直径为40.7±1.8 mm;卵巢上最多可募集卵泡数为6.7±0.8个;发情周期在第15天时,黄体直径达到最大30.5±3.5 mm;有69%的母驴在出现发情症状后的4-6天排卵。(2)在母驴发情周期内FSH浓度呈双波峰模式;LH浓度排卵前最大;P4含量呈现先升高后下降的趋势,E2含量正好相反。(3)卵泡发育相关基因在新疆驴卵泡液中表达存在显著差异,这些结果对研究新疆驴卵泡的发育调控机制研究提供了参考依据。
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