【摘 要】
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第一部分幽门螺杆菌融合蛋白VacA-HpaA卵黄抗体的制备目的:采用基因工程技术大量表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)细胞空泡毒素(vacuolating cytotoxin antige
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第一部分幽门螺杆菌融合蛋白VacA-HpaA卵黄抗体的制备目的:采用基因工程技术大量表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)细胞空泡毒素(vacuolating cytotoxin antigen A,VacA)与粘附素(Helicobacter pylori adhesin A ,HpaA)的融合蛋白(VacA-HpaA),鉴定其抗原性与免疫原性后,以此融合蛋白作为抗原,制备高效价的VacA-HpaA IgY。方法:通过大量培养重组菌pQE30-VacA-HpaA-DH5a,诱导表达获得融合蛋白VacA-HpaA Ni2+-NTA树脂纯化。用Western blot鉴定融合蛋白VacA-HpaA对VacA和HpaA的抗原特异性,用融合蛋白免疫兔,获得多克隆抗血清,采用间接ELISA法检测其分别针对VacA和HpaA的免疫原性。将纯化的融合蛋白免疫鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY。ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化。硫酸铵沉淀法纯化浓缩VacA-HpaA IgY,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot检测其分别对VacA和HpaA的特异抗原性,ELISA法检测效价。
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