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目的:脑血管病与肿瘤、心脏病是发展中国家中导致人类残疾和死亡的三大疾病,并且以缺血性脑血管病最为常见,约占所有脑血管病的80%85%。脑缺血后的继发性脑损伤可导致病情加重并影响预后,其机制十分复杂,包括能量耗竭和酸中毒、氧自由基损伤、细胞内Ca2+超载、兴奋性氨基酸毒性、炎症细胞因子损害、细胞凋亡等等,其中炎症反应和细胞凋亡在缺血性脑损伤的发生发展上起关键性作用。因此,减轻炎症反应和细胞凋亡成为治疗急性脑梗死的新靶点。核因子-κB(Nuclearfactor-kappa B,NF-κB)是一种广泛表达的转录因子,它调控数百个细胞的炎症因子产生及存活,有很多证据表明在脑缺血时NF-κB被激活。在脑缺血时,很多NF-κB的目标基因被激活并且加重脑损伤,例如:TNF,IL-1α and β, IL-6, iNOS, ICAM-1, COX-2, PLA2和MMP9。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-actived protein kinase, MAPK)是脑梗死后激活的信号转导通路之一,在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥特殊作用,其包括细胞外信号调节激酶(external-signal regulated kinase, ERK)信号转导通路调控细胞生长和分化,c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)和p38MAPK信号转导通路。ERK调节细胞的生长、增值、分化和凋亡。在脑缺血时,氧化应激,炎症反应、细胞内Ca2+超载等都会激活ERK。JNK和P38会被环境应激和炎症反应激活,激活的ERK和P38在细胞的凋亡和炎症反应中发挥重要作用。总之,MAPK通过改变基因的表达或者蛋白翻译后的修饰,影响细胞功能和控制的细胞内信号转导。最近动物实验和临床研究发现白杨素可以抑制一氧化氮合酶、前列环素E、环氧化酶-2等关键的促炎症酶。在慢性大鼠脑缺氧模型中,白杨素通过发挥抗氧化应激、抗凋亡的作用,改善认知功能缓解脑损伤。但有关白杨素在脑缺血急性期的保护作用及其机制的研究无文献报道。本实验在大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)所致的脑缺血模型上观察白杨素对脑缺血后神经功能评分、脑水肿、脑梗死体积及NF-κB、p-ERK、p-JNK和p-P38MAPK表达的影响,以期证实白杨素对缺血性脑损伤具有神经保护作用并探讨其可能的机制。方法:采用健康的成年雄性Sprague-Dawley大鼠,按照改良的Longa线栓法建立右侧pMCAO的动物模型。实验动物随机分为假手术组(Sham)、手术组(MCAO)、溶剂对照组(MCAO+OIL)、白杨素低剂量组(MCAO+chrysin10mg/kg,Chr-L)、白杨素高剂量组(MCAO+chrysin40mg/kg,Chr-H)。MCAO+OIL组、Chr-L组和Chr-H组分别于MCAO术前两天灌胃给予1ml/kg玉米油、10mg/kg白杨素、40mg/kg白杨素,并与手术前1小时再给予一次,MCAO组和Sham组给予等容量生理盐水药物。各组大鼠于术后24h采用改良的Longa评分法进行行为学评分,得分为2-4分者纳入实验组。完毕后断头取脑,用干湿重法测定脑组织含水量,用2,3,5-三苯基四唑氮红(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测定脑梗塞体积,蛋白印记法(Western Blot方法)测定NF-κB、P-ERK、P-JNK和P-P38MAPK的水平,定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)RT-PCR法测定NF-κB的表达。结果:1Sham组大鼠未见明显神经功能缺损表现。与MACO组相比较,白杨素大剂量组的24小时神经功能评分得到明显改善,并且存在统计学意义(P <0.05)。白杨素小剂量组的神经功能评分略低于Vehicle组,但差异无统计学意义(P>0.05)。MCAO+OIL组神经功能学评分与MCAO组无明显差异。2MCAO组大鼠梗塞侧脑组织含水量明显升高,且具有统计学意义(MCAO vs. Sham:85.28%±0.31%vs.78.17%±0.42%,P <0.05)。在白杨素干预组中,大剂量组梗塞侧脑组织含水量降至81.09%±0.52%,与MCAO组相比差异有统计学意义(P <0.05)。小剂量组梗塞侧脑组织含水量有所下降,但差异没有统计学意义(Chr-L vs. MCAO:84.87%±0.29%vs.85.28%±0.31%,P>0.05)。MCAO+OIL组与MCAO组梗塞侧脑组织含水量未见明显变化(MCAO+OIL vs. MCAO:85.56%±0.35%vs.85.28%±0.31%,P>0.05)。3Sham组脑组织均匀红染未见梗死灶,MCAO组、MCAO+OIL组、Chr-L组和Chr-H组可见白色的梗死灶,梗塞灶位于右侧皮层和基底节区。MCAO组梗塞体积48.29%±0.94%,MCAP+OIL组梗塞体积为48.41%±1.09%,大剂量白杨素干预后梗塞体积明显减小:35.59%±1.02%,差异有统计学意义(P <0.05)。小剂量白杨素组梗塞体积比Vehicle组减小,但差异无统计学意义(Chr-L vs. MCAO:47.88%±0.68%vs.48.29%±0.94%,P>0.05)。4Western blot检测结果显示脑缺血后24小时NF-κB和p-P38蛋白表达升高。白杨素干预后NF-κB和p-P38蛋白表达降低,大剂量组与MCAO组相比差异有统计学意义(P <0.05)。脑缺血24小时后p-ERK蛋白表达水平降低,白杨素干预后p-ERK蛋白表达升高,大剂量组与MCAO组相比差异有统计学意义(P <0.05)。5RT-PCR结果显示:大剂量白杨素显著升高NF-κB mRNA表达水平,且与MCAO组相比差异有统计学意义(P <0.05)。结论:白杨素可以改善大鼠脑缺血后神经功能缺损,缩小梗死体积,减轻脑水肿,提示白杨素对局灶性脑梗死具有神经保护作用。其保护作用可能与上调p-ERK的表达,同时降低NF-κB和p-P38的表达有关。