牛支原体（Mycoplasma boris，M.bovis）主要引起牛的肺炎、关节炎、乳房炎等。一旦牛场中存有M.bovis就很难消灭，它将会不断地从老年动物传染给新生牛或新引进的牛，而引起持续感染。目前已经在欧洲和北美引起广泛的流行并造成严重的经济损失。我国于2008年首次发生牛支原体感染的病例，已有部分省份陆续出现报道。　　 本研究首先对湖北省患有牛呼吸道疾病的肺脏组织病料进行了病原的分离，对得到的分离物进行生化特性鉴定、16S rRNA基因序列比较、特异性PCR鉴别实验和血清学实验，结果显示，在40×显微镜下可以清楚看到分离物Hubei-1的菌落成明显的“油煎蛋状”，具有典型的支原体菌落特征；其生化特性与牛支原体完全吻合。16S rRNA基因序列比较结果显不，Hubei-1的16S rRNA序列与牛支原体标准株PG45株同源性为99.3％，与无乳支原体（Mycoplasma agalactiae，M.agalactiae）PG2株的同源性为99％。用特异性引物P3/P4进行PCR扩增，可以扩增出1.9 kb大小的片段，而无乳支原体则无扩增片段。将扩增出的片段克隆至pMD18-T-Vector，送上海生工进行测序。测序结果与参考Genbank中登录的M.bovis PG45株进行比对，证明了分离物是牛支原体，此次为我国首次分离得到牛支原体。此后，又对其它7个省份送检的牛肺脏用同样的方法进行病原的分离鉴定，得到7株分离株，结果证明病原均为牛支原体。　　 实验利用PCR技术从8株支原体分离株扩增p81基因，克隆到pMD18-T-Vector，转化到DH5α感受态细胞中送往上海生物工程技术公司进行DNA测序。结果表明p81基因全长2097 bp，我国分离得到的8株M.bovis分离株之间的同源性为99.4～99.9％，与PG45株同源性94.6％～94.9％，与无乳支原体PG2株的同源性为73.8％～74％。我国分离的M.bovis株高度保守，变异率低。M.bovis种内高度保守，种间差异较大，p81基因可以作为诊断M.bovis的靶基因，为M.bovis的鉴别诊断提供依据。　　 测序结果还显示p81基因在第165、684、1447、1674位密码子TGA在支原体编码色氨酸而在大肠杆菌是终止密码子，TGG在大肠杆菌中编码色氨酸。设计四对突变引物在此四个位置进行定点突变，将TGA突变为TGG，将突变后的p81基因截短成四部分，经BamH I和SalⅠ双酶切后克隆到同样酶切处理的pET-30a和pET-32a中，经PCR、酶切鉴定后的重组质粒进行诱导表达，得到4段重组蛋白。分别对重组蛋白进行Western blotting和间接ELISA试验，结果证明，4段重组蛋白在NC膜上均无反应条带，而ELISA结果也显示，只有用P81-3-1455蛋白作为抗原进行试验时，P/N>2.1，证明反应成立，可以用于进行血清学检测。但是却与PS2（牛传染性胸膜肺炎国际标准血清）、M.agalactiae PG2阳性血清有交叉反应。不能用于牛支原体和无乳支原体、牛肺疫的鉴别诊断。　　 本研究成功鉴定出M.bovis病原，对其p81基因进行了序列分析、进化树的对比，对p81基因进行了截短克隆并成功表达出4段重组蛋白，为我国M.bovis感染的的诊断提供了理论依据和基础，填补了我国M.bovis基因及蛋白研究的空白。