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目前对于奶牛乳房炎的治疗抗生素仍是首选,但由于其长期不规范使用,导致病原菌耐药现象严重,乳房炎重要致病菌金黄色葡萄球菌亦然。因此减少抗生素的使用已成为发展趋势。一些中药单体由于其良好的抑菌效果和不易产生耐药性特质而成为研究热点。 本研究以来自临床型奶牛乳房炎乳汁经分子生物学鉴定后的 28 株金黄色葡萄球菌作为试验对象,采用微量肉汤稀释法测定黄芩苷、盐酸小檗碱、硫酸小檗碱3种中药单体对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);通过紫外分光光度法绘制盐酸小檗碱和硫酸小檗碱金葡菌生长曲线;微板法测定培养液上清 AKP 活性;考马斯亮蓝法测定胞外可溶性蛋白含量;扫描电镜(SEM)观察微观形态变化。对金黄色葡萄球菌临床分离菌株在3种中药单体作用前后采用K-B扩散法进行13种抗菌药物敏感性检测;采用PCR技术进行耐药基因检测。结果如下: 1. 各菌株对三种中药单体的MIC值存在差异,通过MIC50和MIC90的统计,结果显示在三种药物中盐酸小檗碱的抑菌作用最强,其MIC90为0.0625 mg/mL;其次是硫酸小檗碱,其MIC90为0.125 mg/mL;黄芩苷抑菌效果较弱,其MIC90为7.813mg/mL。 2. 以不加药组为对照,分别绘制0.5×MIC和1×MIC盐酸小檗碱和硫酸小檗碱加药组生长曲线,发现加药组金黄色葡萄球菌生长一直处于较低水平,且调整期延长。培养液上清中 AKP 活性和胞外蛋白含量随时间均有升高。扫描电镜下,与正常金黄色葡萄球菌相比,经盐酸小檗碱和硫酸小檗碱处理后,菌体表面粗糙,有胀大现象,菌体结构遭到破坏。 3. 28株临床分离株对除四环素、链霉素、万古霉素外的10种抗生素表现出不同程度耐药,青霉素、氨苄西林、克林霉素耐药情况最为严重,耐药率为100%,所有菌株都对 6 种以上抗生素耐药。9 种耐药基因扩增,其中所有菌株均检出了 femA、blaZ、aac(6)/aph(2)、norA。 4. 对金葡菌菌株使用三种中药单体进行耐药性消除后,金黄色葡萄球菌耐药性表型出现不同程度逆转,其中盐酸小檗碱作用较为显著,对庆大霉素耐药率降低64.29 %、卡那霉素降低67.86 %。其次是硫酸小檗碱,黄芩苷耐药率降低相对较少。 5. 三种中药单体作用后,femA、blaZ、aac(6)/aph(2)、norA四种耐药基因基本无变化。 以上结果表明:黄芩苷、盐酸小檗碱和硫酸小檗碱对金黄色葡萄球菌均表现一定的抑菌作用。盐酸小檗碱和硫酸小檗碱可抑制金黄色葡萄球菌的生长,并延长调整期;对细胞壁和细胞膜的损伤作用是其抑菌机理之一。三种单体对金黄色葡萄球菌耐药性具有一定的消除作用,其消除机制有待进一步研究。