第一部分HIF—1a在胃癌及胰腺癌中的表达[目的]研究HIF—1 α在胃癌和胰腺癌组织中的表达以及与临床病理之间的关系。[方法]通过免疫组织化学和Western Blot的方法检测50例胃癌和50例胰腺癌组织中HIF—1 α蛋白的表达；通过Realtime PCR的方法检测HIF—1 a mRNA在胃癌和胰腺癌组织中的表达,并分析HIF—1 α的表达与胃癌和胰腺癌临床病理之间的关系。[结果]HIF—1 α mRNA和蛋白在胃癌和胰腺癌组织中均存在高表达,与癌旁正常组织相比,差别有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中HIF—1 a的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期相关；胰腺癌组织中HIF—1 α的表达与肿瘤大小及淋巴结转移相关。[结论]HIF—1α在胃癌及胰腺癌组织中均存在着高表达。HIF—1a的表达与胃癌和胰腺癌的病理分期有关。第二部分RNAi抑制HIF-1α表达对胰腺癌细胞及糖代谢影响的体外实验第一节HIF-1α基因RNAi慢病毒载体的构建[目的]构建针对HIF—1α基因表达的RNA干扰靶向沉默慢病毒载体。[方法]针对HIF—1α基因核苷酸序列设计干扰片段,和载体连接构建shRNA表达质粒,进行酶切鉴定和阳性克隆质粒测序,随后通过慢病毒载体感染胰腺癌BxPC-3细胞,进行感染效率测定,最后利用定量PCR和Western Blot方法鉴定目的基因表达。[结果]酶切签定、阳性克隆质粒测序、定量PCR和Western Blot测定HIF—1α表达结果说明该RNAi慢病毒载体对目的基因具有较好的干扰效果。[结论]靶向HIF-1α基因的RNAi慢病毒载体构建成功。第二节HIF-1α基因沉默对胰腺癌BxPC-3细胞及糖代谢影响的体外实验[目的]探讨HIF-la基因沉默对胰腺癌细胞生长、侵袭和凋亡的影响；探讨HIF—1α对胰腺癌细胞糖代谢的调控作用。[方法]实验分干扰组、GFP对照组、空白对照组,分别进行两种处理：正常培养、缺氧培养。利用MTT实验绘制胰腺癌细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭；利用乳酸试剂盒测定乳酸含量；利用定量PCR和Western Blot方法测定PDK1、LDHA、PKM2和CS的表达,观察HIF—1α沉默前后相关检测指标的变化。[结果]缺氧条件下,HIF-1α mRNA和蛋白的表达均明显升高,乳酸的生成、糖代谢酶PDK1、LDHA、PKM2 mRNA和蛋白的表达均明显升高,同有氧条件下比较,差别有统计学意义(P<0.05);CS mRNA和蛋白的表达同有氧条件下比较,差别无统计学意义(P>0.05)。缺氧条件下,HIF—1α基因沉默后,乳酸的生成、糖代谢酶PDK1、LDHA、PKM2 mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制,与空载体组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；CS mRNA和蛋白的表达没有受到明显影响,与空载体组比较,差别无统计学意义(P>0.05)。缺氧条件下,HIF—1α基因沉默后,胰腺癌BxPC-3细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,细胞侵袭受到抑制,同空载体组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。[结论]在缺氧条件下,HIF-1α的表达明显增强,它可能通过上调其下游糖酵解相关酶的表达,增强肿瘤的糖酵解代谢；HIF—1α沉默在体外能抑制胰腺癌BxPC-3细胞的生长和侵袭,使其凋亡率升高。第三部分RNAi抑制HIF-1α表达裸鼠成瘤的体内实验[目的]探讨HIF-la基因沉默对裸鼠成瘤的抑制作用[方法]选取裸鼠30只,随机分成3组,每组10只,分别为空白对照组,GFP对照组,干扰组,裸鼠接种成瘤,观察成瘤情况,6周后处死裸鼠,进行瘤体体积和重量的测定。[结果]HIF—1 α基因沉默后,裸鼠移植瘤的体积和重量均明显低于空载体组和空白对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。[结论]HIF—1a沉默在体内能抑制胰腺癌BxPC-3细胞成瘤。