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哺乳动物卵泡发育伴随着卵子的发育和成熟。来源于原始生殖细胞的卵原细胞进入减数分裂并停滞在第一次减数分裂前期的双线期,后被前颗粒细胞包裹后形成原始卵泡。原始卵泡经过初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡等阶段,最后发育为排卵前卵泡。伴随着卵泡发育,卵母细胞体积不断增大。最终在促性腺激素峰的作用下,卵母细胞恢复减数分裂,排出第一极体。然后排卵发生,而残余的卵泡组织形成黄体。卵泡发育和卵子发生的整个过程是受到严密调控的,任何一个步骤发生异常都有可能导致雌性生育力的缺陷。 研究显示,肌球蛋白MyosinⅡ与微丝的动态互作参与了小鼠卵母细胞成熟的过程。在肌肉和非肌肉细胞中肌球蛋白轻链激酶1(Myosin Light Chain Kinase1,MYLK1)可以磷酸化MyosinⅡ的20-kDa调节轻链(regulatory light chain,RLC)进而促进MyosinⅡ与微丝的互作。由于Mylk1全敲的小鼠是致死的,为了探究MYLK1是否通过激活MyosinⅡ参与了卵母细胞减数分裂过程,我们利用GCre-LoxP条件性基因敲除系统在卵子中特异性敲除MYLK1的编码基因Mylk1,灭活MYLK1功能。生育力检测发现Mylk1f/fl;GCre+雌鼠生育力显著下降。进一步的研究发现Mylk1fl/fl;GCre+雌鼠卵母细胞中纺锤体的组装,染色体的排列,同源染色体的分离及第一极体的排出都没受到影响;早期胚胎也能正常发育到桑椹胚期,但是胚胎从桑椹胚到囊胚的转化出现了明显的延迟。这些发育延迟的胚胎虽然能进一步发育到囊胚,但这很有可能致使其错过植入的窗口期,导致植入失败,最终造成实验鼠生育力的下降。以上结果表明,MYLK1对小鼠卵母细胞减数分裂的成熟及早期胚胎发育到桑椹胚期可能是冗余的,但是对囊胚的形成及雌性生育力的维持是不可或缺的。 酪蛋白激酶2(Casein Kinase2,CK2)是广泛表达的丝/苏蛋白激酶,由两个催化亚基α和α及两个调节亚基β组成。其中,CK2β主要负责底物的特异性选择。研究表明,在各种癌症细胞及快速增殖的细胞中CK2的表达量是显著上调的。这提示我们,CK2可能是一种抗凋亡因子。在哺乳动物中,抗凋亡因子对于卵泡的存活与闭锁(follicular atresia)调控起着重要的作用。到目前为止,CK2β在小鼠卵泡发育中的作用还没有报道。本研究利用GCre-LoxP条件性基因敲除系统从原始卵泡开始在卵子中特异性敲除Csnk2b基因,灭活CK2β功能。生殖力测试结果显示,Csnk2bfl/fl; GCre+雌鼠是完全不育的。Csnk2bfl/fl;GCre+雌鼠卵巢体积从第3周开始变小,到第8周时已减少为对照的四分之一左右。卵巢切片的结果显示,Csnk2bfl/fl;GCre+雌鼠卵巢中的生长卵泡数量减少,闭锁卵泡数量增加。到出生后第6-8周时,Csnk2 bf/fl; GCre+雌鼠卵巢已难觅正常的卵泡,显示出典型的卵巢早衰表型。这可能就是Csnk2bfl/fl GCre+雌鼠完全不育的原因。进一步研究发现,在出生后第3周小鼠卵巢颗粒细胞中显示了大范围的凋亡信号,这有可能是卵泡发生闭锁的原因之一。由此可见,CK2β可能作为一种关键的抗凋亡因子参与了小鼠卵泡发育过程。