霉菌毒素的量子点荧光免疫分析技术

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霉菌毒素是产毒霉菌生长时产生的次级代谢产物,其对饲料的污染是现阶段的一个很严重的问题。霉菌毒素可使畜禽的免疫机能和生产性能下降,使之长期处于亚健康的状态,造成一些免疫失败。另外还可引起人或者动物急性、慢性中毒,癌症等疾病,霉菌毒素可通过肉、蛋、奶等食物链进入人体,对人类的健康产生威胁。所以,预防、降低和消除霉菌毒素是食品安全方面的一个重要研究方向。量子点是近几年发展起来的一种新型纳米材料,是一种由Ⅱ-Ⅵ族或Ⅲ-Ⅴ族元素组成的纳米颗粒。量子点的粒径一般介于1-10nm之间,由于电子和空穴被量子限域,连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构,受激后可以发射荧光。与传统的有机荧光染料相比,它具有宽的激发光谱、窄的发射光谱、可精确调谐的发射波长、可忽略的光漂白等优越的荧光特性,可以很好的应用于荧光标记。本文采用CdCl2·2.5H2O和碲粉,在以巯基丙酸为稳定剂的条件下水相合成CdTe量子点,经过反复试验,确定了CdTe量子点的前驱体在室温下反应一个小时, pH为9.2的时候制备出的CdTe量子点的量子产率最高,荧光最强。随着回流时间的增长,CdTe量子点的颜色在紫外下由绿色逐渐完成向淡黄色、黄色、橙红色、红色的转变。于此同时粒径也随着回流时间的增加而增大。对赭曲霉毒素A的细胞株进行复苏,注射获得小鼠腹水,进而选择辛酸硫酸铵法进行腹水纯化,结果得到效果较好,纯化效率很高的赭曲霉毒素单克隆抗体,与发射波长为610nm左右稳定的CdTe量子点进行偶联,分别进行了紫外吸收光谱和荧光光谱鉴定,初步判断偶联成功。最后经过斑点试验,很好的验证了偶联的成功,以及抗体仍然保留原有的生物活性。利用已经制备好的MAb-CdTe荧光探针,建立了直接竞争荧光免疫分析技术,该方法在10%乙醇溶液中的半数抑制(IC50)为0.630ng/mL,最低检测线(LOD)为0.0594ng/mL。检测线性范围为0.091~3.184ng/mL。利用相同的方法制备出二抗-CdTe荧光探针,建立了间接竞争荧光免疫分析技术,在10%乙醇溶液中的半数抑制(IC50)为0.217ng/mL,最低检测线(LOD)为0.0172ng/mL。检测线性范围为0.0140~2.753ng/mL。利用制备好的MAb-CdTe荧光探针同时又建立了荧光免疫层析试纸条,该试纸条的检测限为5ng/mL,试纸条检测结果在0~100000ng/ml的浓度范围内有效。并且经过验证具有良好的特异性。最后对三种荧光免疫分析技术进行了比较,发现FLISA技术的灵敏度比荧光免疫层析试纸条要高,但是操作没有试纸条方便,并且没有试纸条节省时间,而所制备的荧光免疫层析试纸条已经完全可以满足国标对食品以及饲料中OTA残留的要求。
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