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目的：探讨雷公藤多苷对变应性接触性皮炎(Allergic Contact Dermatitis，ACD)小鼠T淋巴细胞亚群及其凋亡的影响，以及ACD小鼠淋巴细胞凋亡的机理，从而了解雷公藤治疗ACD的部分机制，为临床科学合理地应用雷公藤多苷治疗ACD提供一定的理论依据。方法：应用二硝基氯苯(DNCB)刺激小鼠皮肤制作经典的变应性接触性皮炎动物模型。分离ACD小鼠脾淋巴细胞进行体外培养，采用不同浓度的雷公藤多苷刺激48h后，收集细胞进行如下实验：1雷公藤多苷对体外培养ACD小鼠淋巴细胞亚群的影响采用流式细胞仪检测CD3~+、Th(CD4~+)和Tc(CD8~+)亚群的含量；2雷公藤多苷对体外培养的ACD小鼠淋巴细胞细胞凋亡的影响2．1细胞凋亡和细胞周期检测细胞用碘化丙吡啶PI处理，流式细胞仪检测亚二倍体细胞(凋亡细胞)、二倍体细胞(G0／G1期)、DNA合成期(S期)及四倍体期细胞(G2／M期)的百分率；2．2细胞早期凋亡的检测利用Annexin V-FITC Kit检测试剂盒和流式细胞仪检测早期凋亡细胞；2．3 Th细胞Fas表达的影响利用PE anti-mouse CD95(Fas／APO-1)、APC-Cy7 anti-mouse CD4荧光抗体双色法检测；2．4体外培养ACD小鼠淋巴细胞内Caspase-8表达利用CaspGLOWTM Fluorescein Actire Caspase-8 Staining Kit试剂盒，检测雷公藤多苷对体外培养ACD小鼠淋巴细胞内Caspase-8的影响。3 T淋巴细胞Bcl-2及Bax的mRNA表达影响采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法检测雷公藤多苷对体外培养ACD小鼠T淋巴细胞Bcl-2及Bax mRNA水平的影响。结果：1雷公藤多苷各浓度组体外培养的ACD小鼠Th淋巴细胞的含量均低于对照组且差异具有显著统计学意义(P＜0.01)，高浓度组与低浓度组之间的差异也具有显著统计学意义(P＜0.01)。高浓度与中浓度组和中浓度组与低浓度组Th淋巴细胞的含量的差异具有统计学意义(P＜0.05)。雷公藤多苷各浓度组体外培养的ACD小鼠Tc淋巴细胞的含量均低于对照组且其中高浓度组与对照组差异具有显著统计学意义(P＜0.01)，中低浓度组与对照组差异具有统计学意义(P＜0.05)。雷公藤多苷高浓度组CD3~+细胞的含量显著低于对照组，差异具有显著统计学意义(P＜0.01)。2雷公藤多苷可以增加体外培养的ACD小鼠淋巴细胞G1期细胞的比例，减低S期和G2期细胞的比例，增加亚二倍体细胞的比例。雷公藤多苷对G1期细胞的影响高浓度组与其他各组间差异均具有统计学意义，其中雷公藤多苷高浓度组与对照组及低浓度组间差异具有显著性(P＜0.01)，雷公藤多苷高浓度组与中浓度组间差异具有统计学意义(P＜0.05)，雷公藤多苷中浓度组与对照组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。雷公藤多苷对S期细胞的影响各浓度组与对照组比较差异具有显著性(P＜0.01)，雷公藤多苷高浓度组与对照组、低浓度组、中浓度组比较差异具有显著性(P＜0.01)。雷公藤多苷对G2期细胞的影响高浓度组与其他各组间差异均具有统计学意义，其中雷公藤多苷高浓度组与对照组及低浓度组间差异具有显著性(P＜0.01)，雷公藤多苷高浓度组与中浓度组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。雷公藤多苷对亚二倍体期细胞的影响高浓度组与对照组间差异具有显著性(P＜001)，雷公藤多苷高浓度组与低浓度组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。3雷公藤多苷中高浓度可以诱导细胞凋亡，雷公藤多苷低浓度对凋亡影响无统计学意义。雷公藤多苷高中浓度组凋亡细胞比率均高于对照组(P＜0.01)；同时雷公藤多苷高中浓度组凋亡细胞比率均高于低浓度组(P＜0.01)。4雷公藤多苷三个浓度组体外培养的ACD小鼠淋巴细胞Fas表达与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，其中高浓度组、中浓度组分别与对照组比较均有显著差异(P＜0.01)。雷公藤多苷高浓度组体外培养的ACD小鼠淋巴细胞Fas表达与中浓度组、低浓度组分别比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。5雷公藤多苷对体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达与浓度有关。雷公藤多苷低浓度对体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达有抑制作用，随着雷公藤多苷浓度升高，抑制作用减弱或消失。雷公藤多苷低浓度组与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，低浓度组体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达低于对照组。雷公藤多苷低浓度组对体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达与中浓度组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。低浓度组和高浓度组间差异有显著性(P＜0.01)。6雷公藤多苷高浓度组对体外培养的ACD小鼠淋巴细胞Bax表达显著高于对照组(P＜0.01)。雷公藤多苷高浓度组与低浓度组间差异有统计学意义(P＜0.05)，高浓度组高于低浓度组。雷公藤多苷各浓度组Bcl-2均没有表达。结论1雷公藤多苷可以减少CD3~+成熟T淋巴细胞，非特异性地降低Ⅳ型变态反应主要效应细胞CD4~+T及CD8~+T亚群比例，并使CD4~+T／CD8~+T比值降低，这种对T淋巴细胞亚群非选择性、非平衡性的抑制作用，可能使患者机体内存在的各免疫细胞亚群之间的平衡发生变化，使免疫系统的紊乱得以改善。2雷公藤多苷可以促使体外培养ACD小鼠淋巴细胞的凋亡，而且可以影响G1期细胞比率，降低S期和G2期细胞的比率，诱导其淋巴细胞发生凋亡，可能为抑制ACD小鼠淋巴细胞增殖的机理之一。3初步明确了雷公藤多苷对体外培养ACD小鼠淋巴细胞凋亡机理：通过多途径影响细胞的凋亡，该途径包括：3．1雷公藤多苷对体外培养ACD小鼠Th淋巴细胞表面Fas表达影响显著，均可以提高Fas表达，在诱导其凋亡过程中起到重要作用；3．2雷公藤多苷对体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达与浓度有关。雷公藤多苷低浓度对体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达有抑制作用，随着雷公藤多苷浓度升高，抑制作用减弱。3．3雷公藤多苷可以诱导Bax mRNA基因的表达，促进细胞的凋亡，通过使Bax／Bcl-2比例增高，诱导细胞的凋亡；雷公藤多苷诱导凋亡作用可能与通过上调Fas表达，调控Caspase-8蛋白表达、诱导Bax mRNA的表达有关。