【摘 要】
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目的1.探讨脑死亡状态下大鼠胰腺组织是否发生炎性反应和细胞凋亡。2.研究TCY-NH2在脑死亡大鼠状态下是否对胰腺组织具有保护作用及相关分子机制,希望为提高供胰质量提供可靠的理论基础。方法选用18只雄性SD大鼠随机分组3组:假手术组,除不加压诱导脑死亡,余操作同脑死亡组;脑死亡组,采用颅内缓慢间断加压诱导大鼠脑死亡,维持脑死亡状态6h;TCY-NH2组,在加压诱导脑死亡时用TCY-NH2（0.6m
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目的1.探讨脑死亡状态下大鼠胰腺组织是否发生炎性反应和细胞凋亡。2.研究TCY-NH2在脑死亡大鼠状态下是否对胰腺组织具有保护作用及相关分子机制,希望为提高供胰质量提供可靠的理论基础。方法选用18只雄性SD大鼠随机分组3组:假手术组,除不加压诱导脑死亡,余操作同脑死亡组;脑死亡组,采用颅内缓慢间断加压诱导大鼠脑死亡,维持脑死亡状态6h;TCY-NH2组,在加压诱导脑死亡时用TCY-NH2（0.6mg/kg,ⅳ）处理大鼠,余操作同脑死亡组。在脑死亡6h后留取胰腺和血液标本。生化分析仪检测血淀粉酶和血脂肪酶水平。IHC检测MPO表达。实时荧光定量PCR检测炎性相关目的基因TNF-α、IL-1β、VCAM-1以及ICAM-1的mRNA表达。TUNEL检测胰腺细胞凋亡。Western Blot检测p-IκBα、IκBα、p-p65、Bax、Bcl2以及cl-Caspase3蛋白表达。结果1.在脑死亡大鼠血清中,与假手术组比较,脑死亡组的血脂肪酶无显著变化（P＞0.05）,而血淀粉酶明显升高（P＜0.05）;与脑死亡组比较,TCY-NH2组的血脂肪酶无显著变化（P＞0.05）,而血淀粉酶明显下降（P＜0.05）。这表明TCY-NH2可以降低脑死亡状态下血淀粉酶水平。2.胰腺组织中性粒细胞浸润情况。与假手术组比,脑死亡组胰腺组织中性粒细胞浸润明显增加（P＜0.05）;与脑死亡组比,TCY-NH2组胰腺组织中性粒细胞浸润明显减少（P＜0.05）。通过免疫组化MPO染色结果表明在脑死亡状态下TCY-NH2可以有效抑制中性粒细胞向供胰组织浸润。3.胰腺组织中炎症介质的表达情况。与假手术组比较,脑死亡组的胰腺组织中IL-1β、TNF-α、VCAM-1以及ICAM-1的mRNA表达明显升高（P＜0.05）;与脑死亡组比较,TCY-NH2组胰腺组织中IL-1β、TNF-α、VCAM-1以及ICAM-1的mRNA表达明显降低（P＜0.05）。通过RT-PCR结果表明在脑死亡状态下TCY-NH2可以有效减少供胰炎性介质的表达。4.胰腺组织中NF-κB信号通路相关蛋白的变化。与假手术组比较,脑死亡组胰腺组织中p-IκBα和p-p65的蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与脑死亡组比较,TCY-NH2组胰腺组织中p-IκBα和p-p65的蛋白表达明显降低（P＜0.05）;与假手术组比较,脑死亡组的胰腺组织中IκBα蛋白表达明显降低（P＜0.05）;与脑死亡组比较,TCY-NH2组胰腺组织中IκBα蛋白表达明显升高（P＜0.05）。通过Western blot结果表明在脑死亡状态下TCY-NH2可以有效抑制NF-κB信号通路的激活。5.胰腺组织中细胞凋亡情况。与假手术组比较,脑死亡组胰腺组织中细胞凋亡明显增加（P＜0.05）;与脑死亡组比较,TCY-NH2组胰腺组织中细胞凋亡明显减少（P＜0.05）。通过TUNEL检测结果表明在脑死亡状态下TCY-NH2可以改善胰腺组织中细胞的凋亡。6.胰腺组织中凋亡相关蛋白的变化。与假手术组比较,脑死亡组胰腺组织中Bax和cl-Caspase3的蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与脑死亡组比较,TCY-NH2组的胰腺组织中Bax和cl-Caspase3的蛋白表达明显降低（P＜0.05）;与假手术组比较,脑死亡组胰腺组织中Bcl2蛋白表达明显降低（P＜0.05）;与脑死亡组比较,TCY-NH2组胰腺组织中Bcl2蛋白表达明显升高（P＜0.05）。通过Western blot结果表明在脑死亡状态下TCY-NH2可以有效调控凋亡通路蛋白的表达。结论1.脑死亡可以引起供体血淀粉酶升高、胰腺组织中性粒细胞浸润以及细胞凋亡。2.TCY-NH2通过抑制NF-κB信号通路,下调炎性因子表达,减少中性粒细胞募集,降低脑死亡供体胰腺组织中的炎性反应。3.TCY-NH2通过下调Bax和cl-Caspase3,上调Bcl2蛋白表达减轻脑死亡诱导的胰腺细胞凋亡。
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