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近年来，食用水产品而导致的过敏事件不断发生，因此水产品的食用安全性受到了越来越多的重视。以蟹类为代表的甲壳类动物是联合国粮农组织公布的常见过敏食物之一，其中的原肌球蛋白（Tropomyosin，TM）和精氨酸激酶（Arginine kinase，AK）是存在于甲壳类和软体动物中的泛过敏原。研究表明，过敏原能够引发过敏反应的物质基础是抗原表位，对食物过敏原抗原表位的研究可以指导开展低过敏甚至无过敏性食品的加工。迄今为止，已在甲壳类动物和软体动物的TM中发现了8个抗原表位，然而对AK抗原表位的研究相对较少。本文以拟穴青蟹为研究对象，通过饱和硫酸铵盐析和Q-Sepharose柱层析的方法分离纯化得到AK。通过双向电泳（2-D）、过碘酸希夫试剂（PAS）染色证明AK是分子量为40kDa，等电点为6.5的糖蛋白。稳定性试验结果表明，AK在pH1.0-11.0范围内均较为稳定，但不耐热，经热处理（>44°C）的AK易形成二聚体和多聚体。模拟胃肠液消化实验结果表明，AK不易被胰蛋白酶降解，易被胃蛋白酶降解，经胃蛋白酶酶解的AK仍具有IgE结合能力。抑制性免疫印迹实验结果表明，拟穴青蟹AK与其它甲壳类AK具有免疫交叉反应。通过分析变性直链型和天然构象型AK与过敏患者血清的IgE结合反应发现，在9份过敏患者血清中有8份能与天然构象型AK反应，然而能与变性直链型AK反应的血清只有3份，因此确定拟穴青蟹AK的抗原表位以构象型为主。采用RT-PCR和RACE的方法获得AK的cDNA序列全长1457bp，其中开放阅读框（Open reading frame，ORF）长1074bp，编码357个氨基酸，其理论分子量为40.29kDa，等电点为6.44。核苷酸序列和其推导氨基酸序列在Genbank登录号分别为：JN828652和AFA45340。生物信息学分析结果显示，AK在位于215-218残基处具有一个N-糖基化位点；位于271-278残基处具有ATP: guanido phosphor-transferase活性位点；Motif预测表明它们隶属于磷酸原激酶家族。采用SWISS-MODEL服务器对拟穴青蟹AK进行自动建模，得到其三维结构。分别使用DNA STAR Protean和DiscoTope2.0软件预测出了拟穴青蟹AK的9个线性和7个构象型B细胞抗原表位。对拟穴青蟹AK进行表达和分段表达，其表达产物rAK、rAK1、rAK2与甲壳类过敏患者血清具有较强的IgE结合能力，而rAK3的IgE结合能力很弱，说明rAK1和rAK2所在区域为抗原表位优势区。此外，通过重叠肽库的方法发现了拟穴青蟹AK的3个线性抗原表位（Epitope1：127-141, Epitope2：141-155和Epitope3：211-225），并模拟出这3个线性表位在三级结构中的位置，值得一提的是这三个抗原表位就位于rAK1和rAK2所在区域。本研究对蟹类AK的过敏性和构效关系进行了分析，初步确定了其抗原表位的类型和抗原表位优势区。这些结果可望为全面了解蟹类过敏原，指导低过敏性食品的开发提供理论依据，同时为蟹类过敏性疾病的诊断和治疗奠定基础。