食物和交配对绿盲蝽卵巢发育影响的研究

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近年来,随着农业产业结构的调整以及Bt(Bacillus thuringiensis)棉的广泛种植,绿盲蝽Apolygus lucorum种群发生数量剧增,危害加重,成为我国棉花上的主要害虫。由于长期以来绿盲蝽一直属于棉花上的次要害虫,关于其生殖生理方面的研究较少。本文以绿盲蝽为研究对象,首次系统研究了绿盲蝽雌性成虫的卵巢发育动态以及营养和交配情况对其卵巢发育的影响。主要研究结果如下:绿盲蝽雌性成虫有1对卵巢,每个卵巢由7根卵巢管组成。刚从体内剥离出来的卵巢为纺锤形,卵巢管的端丝部分常聚合在一起。每根卵巢管由三部分组成:端丝(terminal filament)、卵巢管(egg tube)、卵巢管柄(pedical)。卵巢管本部包括生殖区(germarium,即原卵区)和生长区(vitellarium,即卵黄区)。绿盲蝽的卵巢管为典型的端滋式(telotrophic type),滋养细胞集中在生殖区。同一卵巢管内可含有处于卵黄发生前期、卵黄发生期、成熟期的卵子。结合卵巢管长度、卵母细胞发育和卵黄蛋白沉积情况,将卵巢分为Ⅰ-Ⅴ级。初羽化的绿盲蝽卵巢体积较小,观察不到发育着的卵子。随着日龄的增加,卵巢开始逐渐发育,当发育到Ⅱ级时,在生长区可观测到卵黄蛋白沉积。简言之,产卵前期的绿盲蝽雌虫卵巢处于I–III级,处于产卵期的绿盲蝽卵巢为IV–V级。用植物性、动物性、动植物混合性这三种类型的食物分别饲喂绿盲蝽,研究发现取食不同类型的食物并不影响绿盲蝽卵巢的基本结构,但是会显著影响卵巢的发育进程。三种食物处理中,仅取食棉铃虫卵的绿盲蝽卵巢发育迟缓,卵巢内所含卵子数目较少,卵巢最不发达;仅取食四季豆的绿盲蝽卵巢发育属中等水平;既取食四季豆又取食棉铃虫卵的绿盲蝽卵巢发育最早,卵巢内含有较多数目的卵子,卵巢最发达。同时取食四季豆和棉铃虫卵的绿盲蝽雌虫卵巢内处于卵黄发生前期、卵黄发生期、成熟期的卵子数目显著高于单独取食一种食物的。交配对绿盲蝽雌虫的卵巢发育和产卵有促进作用。与未交配的绿盲蝽相比,正常交配的绿盲蝽雌虫在产卵前期(7日龄之前)卵巢内总的卵子数目、处于卵黄发生期的卵子数目、成熟卵数目、最长卵巢管长度、卵巢分数均显著提高。当进入产卵期后,未交配的绿盲蝽成虫几乎不产卵,尤其20日龄之后,卵巢内仍存在大量成熟卵,而此时正常交配的绿盲蝽卵巢已开始向Ⅴ级卵巢发育。此外,在未交配的绿盲蝽卵巢内观测到卵子退化现象。通过设计简并引物及RACE技术,获得了绿盲蝽卵黄原蛋白(Vitellogenin,Vg)基因全长cDNA序列。克隆得到的绿盲蝽Vg基因cDNA全长6131bp,开放阅读框长度为5988bp,共编码1996个氨基酸,预测分子量为218.3kDa,等电点为9.02,GENEBANK登录号为JQ867181(未公布)。其中3’非编码区86bp,5’非编码区57bp。信号肽分析发现,前17个氨基酸为信号肽。利用荧光定量PCR技术检测了营养和交配状况对绿盲蝽不同时期Vg基因转录水平的影响,分析发现,不同类型的食物和交配情况显著影响Vg基因的表达。无论何种处理,初羽化的绿盲蝽体内卵黄原蛋白基因表达量极低,随后升高。既取食四季豆又取食棉铃虫卵的绿盲蝽体内Vg表达量显著高于仅取食一种食物的;与交配过的绿盲蝽相比,未交配的绿盲蝽15、20日龄时的Vg表达量显著降低。综上所述,通过系统研究绿盲蝽卵巢发育,揭示了绿盲蝽卵巢的发育动态以及营养与交配对绿盲蝽卵巢发育的影响,明确了杂食对于绿盲蝽卵巢发育的有利作用,明确了交配促进绿盲蝽卵巢发育及产卵;同时,克隆鉴定了绿盲蝽的卵黄原蛋白基因,明确了营养和交配对其表达动态的影响。这些结果对于深入了解绿盲蝽的卵巢发育以及开发该虫的防控技术具有重要意义。
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