RA诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为精原干细胞及Stra8启动子的研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jonasen128
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具广泛的临床调查显示,不孕不育症正困扰着13%的夫妇,越来越多的证据显示,由于男性原因造成的不能生育正在不断的增加,已经达到了半数的比例。近年来的一些研究结果,让人们看到了利用干细胞诱导分化的方法治疗男性不育的希望。视黄酸对维持正常的雄性睾丸结构和功能起着重要的作用。近来的研究发现,在雄性生殖腺发育过程中有一组基因,它们可以被视黄酸特异性的诱导活化,称为Stra(Stimulated byRetinoic Acid)基因。从鼠源分离得到的Stra 8基因编码一种细胞质蛋白,该基因只特异性的在成熟雄性生殖细胞中表达,其功能被认为与精子形成有关。为研究Stra,8基因的表达特性,我们从小鼠的基因组中克隆了Stra8基因的启动子序列(1.4 kb)。将Stra8基因的1.4 kb启动子序列克隆到pEGFP-1载体的EGFP基因之前,构建成由Stra8基因1.4kb启动子序列调控表达绿色荧光蛋白的pStra8-EGFP载体。将其分别转化到不同类型的细胞中,如小鼠ES-129细胞、人胎儿胰腺干细胞、小鼠骨髓间充质干细胞和小鼠精原干细胞等,通过荧光显微镜观察发现,绿色荧光蛋白只在小鼠精原干细胞中表达,表明Stra8基因是组织特异性表达的基因。将pStra8-EGFP转染小鼠骨髓间充质干细胞,经G418筛选2周后,用视黄酸诱导,12小时培养后,有一部分转染pStra8-EGFP载体的细胞表达绿色荧光蛋白。RT-PCR证明这些细胞中有精原干细胞特异表达基因Stra8的转录,还有生殖细胞特异表达基因CyclinA2和Oct4的转录。构建了分别含有405bp和65bp的Stra8基因启动子的pStra8-EGFP载体,将这两个载体转化小鼠精原干细胞,包含两个视黄酸结合位点和一些启动子因子的405bp的启动子可以启动绿色荧光蛋白的表达,65bp的启动子不能启动绿色荧光蛋白的表达。
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