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鹅作为水禽家族中的重要成员,具备肉用、蛋用、绒用等多种重要经济价值。绒用价值在其中更是占据着重要的地位。目前,我国对于鹅羽绒发育的研究相对较少且其发育机制也尚不明确。针对这一问题,我们从毛囊的发生发育原理为切入点进行研究为鹅羽绒业的发展提供强有力的依据。迄今为止,众多研究表明毛囊的发育过程与Wnt/β-catenin信号通路的调控息息相关。本试验以吉林白鹅和卡洛斯鹅为试验动物,采集其不同发育节点的背部皮肤毛囊并以其为试验样本进行试验。通过荧光定量PCR技术、Western-blot技术分别对Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin及LEF1基因的mRNA水平及蛋白水平的表达情况进行检测,同时利用免疫组织化学(IHC)试验对两目的蛋白在毛囊中的表达位点进行定位研究。研究结果如下:
(1)利用荧光定量PCR(即qPCR)技术对吉林白鹅(E12、E18、E28、D18、D48、D88)及卡洛斯鹅(E13、E18、E28、D18、D48、D88)不同时期背部皮肤毛囊中β-catenin和LEF1基因mRNA的表达水平进行检测,同时检验其显著性。结果表明:β-catenin及LEF1基因在吉林白鹅及卡洛斯鹅的各个生长节点的背部皮肤毛囊中均有表达,且不同时期的表达水平之间存在显著差异性(p<0.05)。其中不同目的基因在同一品种鹅的皮肤毛囊中呈现相同的表达趋势。在吉林白鹅的背部皮肤毛囊中,β-catenin及LEF1基因的mRNA呈现先降低后升高的“V”字形表达趋势,于D88时达到最高表达水平;而在卡洛斯鹅的背部皮肤毛囊中呈现折线式上升的趋势(即先升高再降低而后重复此趋势),且在D18及D88时呈现最高表达水平,与吉林白鹅相同的是其胚胎期各阶段的表达水平均显著低于生后期各阶段。
(2)利用IHC技术(免疫组织化学)对β-catenin及LEF1蛋白在吉林白鹅及卡洛斯鹅背部皮肤毛囊中的表达位点进行研究。结果表明:两种目的蛋白在吉林白鹅和卡洛斯鹅背部皮肤的整个发育阶段均有表达,且表达位点存在差异。目的蛋白在胚胎阶段主要表达于表皮层(E)和基板(P),而在生后期的表达位点则主要集中于毛乳头(DP)部位。
(3)利用Western-blot(蛋白免疫印迹)方法对β-catenin及LEF1蛋白在吉林白鹅及卡洛斯鹅背部皮肤毛囊中的表达水平进行分析,得到试验结果:纵观吉林白鹅的背部皮肤毛囊的整个发育阶段,β-catenin基因于E12呈现最高表达水平,E18及E28时表达量最低(P<0.05),LEF1蛋白则在E28时呈现最高表达水平,D88时表达量最低(P<0.05)。而在卡洛斯鹅的背部皮肤毛囊整个发育进程中,β-catenin蛋白于D48时呈现最高表达水平,E13和E28时最低(P<0.05);而LEF1蛋白则在D18时表达量最高,E13时最低(P<0.05)。
(1)利用荧光定量PCR(即qPCR)技术对吉林白鹅(E12、E18、E28、D18、D48、D88)及卡洛斯鹅(E13、E18、E28、D18、D48、D88)不同时期背部皮肤毛囊中β-catenin和LEF1基因mRNA的表达水平进行检测,同时检验其显著性。结果表明:β-catenin及LEF1基因在吉林白鹅及卡洛斯鹅的各个生长节点的背部皮肤毛囊中均有表达,且不同时期的表达水平之间存在显著差异性(p<0.05)。其中不同目的基因在同一品种鹅的皮肤毛囊中呈现相同的表达趋势。在吉林白鹅的背部皮肤毛囊中,β-catenin及LEF1基因的mRNA呈现先降低后升高的“V”字形表达趋势,于D88时达到最高表达水平;而在卡洛斯鹅的背部皮肤毛囊中呈现折线式上升的趋势(即先升高再降低而后重复此趋势),且在D18及D88时呈现最高表达水平,与吉林白鹅相同的是其胚胎期各阶段的表达水平均显著低于生后期各阶段。
(2)利用IHC技术(免疫组织化学)对β-catenin及LEF1蛋白在吉林白鹅及卡洛斯鹅背部皮肤毛囊中的表达位点进行研究。结果表明:两种目的蛋白在吉林白鹅和卡洛斯鹅背部皮肤的整个发育阶段均有表达,且表达位点存在差异。目的蛋白在胚胎阶段主要表达于表皮层(E)和基板(P),而在生后期的表达位点则主要集中于毛乳头(DP)部位。
(3)利用Western-blot(蛋白免疫印迹)方法对β-catenin及LEF1蛋白在吉林白鹅及卡洛斯鹅背部皮肤毛囊中的表达水平进行分析,得到试验结果:纵观吉林白鹅的背部皮肤毛囊的整个发育阶段,β-catenin基因于E12呈现最高表达水平,E18及E28时表达量最低(P<0.05),LEF1蛋白则在E28时呈现最高表达水平,D88时表达量最低(P<0.05)。而在卡洛斯鹅的背部皮肤毛囊整个发育进程中,β-catenin蛋白于D48时呈现最高表达水平,E13和E28时最低(P<0.05);而LEF1蛋白则在D18时表达量最高,E13时最低(P<0.05)。