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孕酮(progesterone,PROG)是维持妊娠所需的一种重要类固醇激素。随着研究深入发现神经系统可以合成和分泌孕酮,它是神经系统中一种重要的信号分子,可以影响神经系统的功能。在临床上,人们越来越关注用雌激素、孕激素治疗神经系统疾病。背根神经节(dorsa root ganglion,DRG)是感觉信号传入的第一级驿站,收集外周感觉信息进行初步加工,再传递给中枢;我们实验室研究发现家兔DRG血管通透性大于大脑血管通透性,说明DRG存在接受信号分子的条件;再加上DRG内部有内分泌-免疫信号分子受体存在,这意味DRG是神经内分泌免疫重要节点。因此DRG在各种感觉信息的传递和调制中具有重要意义。樊娟等(2009)研究发现孕酮和ATP影响DRG神经元膜电位的变化。那么孕酮和ATP对DRG神经元胞内游离钙离子产生什么影响?目前尚不清楚。P2X3受体是ATP受体家族中一员,DRG最主要表达P2X3受体,且P2X3受体对Ca2+通透性最为显著。本研究采用双重免疫荧光标记孕激素受体(PR)和P2X3受体在DRG神经元的分布特点;采用MTT法检测不同浓度的孕酮对体外培养的DRG神经元活性的影响;采用激光共聚焦显微镜技术实时动态监测不同浓度的ATP和孕酮对DRG神经元胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。研究结果如下:(1)培养第3d时,细胞以中小型神经元为主(97.179%),均为孕激素受体(PR)和P2X3受体荧光双标记细胞。(2)ATP能快速诱导感觉神经元胞内[Ca2+]i的快速上升,且存在浓度依赖效应,其中1000μmol/L ATP可诱导感觉神经元内[Ca2+]i标准化荧光值(F/F0)达1.696,经SPSS 22利用单因子方差分析检验差异极显著;1000μmol/L ATP刺激时,无Ca2+和含Ca2+培养液中感觉神经元内Ca2+标准化荧光值(F/F0)分别为1.304和1.696,且二者之间差异显著(P﹤0.05)。(3)孕酮诱导仔兔DRG神经元胞内钙离子浓度的变化差异不显著,但呈现三种趋势:钙离子浓度增加、钙离子浓度变化不明显、钙离子浓度降低,其中以钙离子浓度降低类的神经元为主,且随孕酮浓度增加,百分比减低(90.91%、84.61%、72.73%、70.00%)。(4)在无钙和含Ca2+培养液中,以1000μmol/L ATP为刺激物,孕酮对神经元胞内[Ca2+]i变化的有显著影响,具有剂量依赖性;孕酮相同浓度组,无Ca2+和含Ca2+培养液对神经元胞内[Ca2+]i变化的影响具有极显著性差异。研究表明:DRG中小型神经元存在孕激素和ATP作用的条件。ATP增加仔兔DRG神经元胞内[Ca2+]i方式可能以外钙内流为主和内钙释放为辅。仔兔DRG中小型神经元对孕酮的敏感性不同,孕酮本身不影响神经元内Ca2+释放,孕酮可能通过孕酮受体影响P2X3受体信号转导途径进而影响神经元内钙释放使胞内[Ca2+]i增加。